貫通微小電極アレイを用いた展開した海馬組織の神経活動の記録

神経組織からの電気信号を記録する貫通微小電極アレイ(PMEA)を含む記録チャンバーを取ります。

三弁コネクタを使用して、酸素化aCSFおよび4-アミノピリジンまたは4-APを含む酸素化aCSFを含むボトルに入口を接続します。

コンセントを真空管に取り付けます。

入口と三枚貝の間のパイプラインを生理学的温度まで加熱します。

入口と出口を閉じた状態で、展開した海馬をチャンバーに移します。

顕微鏡下で、海馬をPMEA上に配置します。

チャンバーから溶液を取り出します。

組織アンカーを配置して、組織をPMEA電極に保持します。

入口と出口を開いて、aCSFフローを開始します。

組織をaCSFでインキュベートして、ニューロンの順応を可能にします。

次に、4-AP を使用して aCSF を流します。4-APはニューロンのカリウムチャネルを遮断し、活動電位の持続時間を延長します。

PMEAは、海馬ニューロンからの増強された神経発火に比例した電気信号を捕捉します。

この手順では、1 つのボトルに通常の aCSF を充填し、もう 1 つのボトルに 4-AP aCSF を充填します。実験の開始から、95%の酸素、5%の二酸化炭素で溶液を泡立てます。三弁コネクタを使用して、実験中に選択する溶液を制御します。

次に、真空管をチャンバーの出口に接続し、溶液をダストコンテナに取り出します。溶液を記録チャンバーに供給する前にパイプラインを加熱し、摂氏35度の制御された温度に保ちます。記録チャンバーの入口と出口を閉じた後、特注のガラスピペットスポイトを使用して、展開した海馬を記録チャンバーに移します。

顕微鏡下で、展開した海馬を、その明らかな面を下に向けて、CA3領域を反対側を向き、CA1フィールドを研究者の方に向けて配置します。チャンバーが乾燥して組織がアレイ上になるまで、真空ピペットを使用して記録チャンバーの端からチャンバー内の溶液を慎重に吸引します。

次に、特注のティッシュアンカーを組織の上に慎重に配置し、展開した海馬をアレイに保持します。記録チャンバーに数滴の溶液を補充します。入口と出口を徐々に開き、IV ドリップ チャンバー内の流量を毎秒約 2 滴に調整します。

記録チャンバー内の組織を正常なaCSFで約1分間インキュベートします。次に、溶液供給を 4-AP 溶解 aCSF に切り替え、流量を適切に調整します。記録する前に、組織を4-AP溶解aCSF中で約5〜10分間インキュベートします。