JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 4:00 分 • July 8th, 2025
ショウジョウバエを頭を露出させたホルダーに取り付けます。
片目に開口部を作り、角膜を取り除いて網膜を露出させます。
ホルダーを記録プラットフォームに置きます。
生理食塩水を含む鈍い参照電極をヘッドカプセルに挿入します。
次に、細胞内環境を模倣する溶液を含む鋭い記録電極を開口部から網膜に挿入します。
目を暗闇に適応させます。
記録電極の抵抗を測定して、記録に適しているかどうかを確認します。
次に、記録電極と参照電極の間のベースライン電圧差を排除します。
暗順応中、網膜光受容細胞の特定のイオンチャネルは開いたままになり、安定した正イオン流入が可能になります。
ライトフラッシュで目を刺激します。
これに応じて、イオンチャネルが閉じ、正イオンの流入が減少し、流出が促進されます。
その結果、光受容体の膜電位は、電圧の低下として記録電極によって測定され、より負になります。
微小電極アンプを操作するときは、静電気を防ぐために、常にファラデーケージまたは防振テーブルの金属面に触れて接地してください。取り付けられたフライをフライ準備プラットフォームポールに固定します。
ハエの左目が調査員を真っ向くようにフライホルダーを回転させます。次に、小さくて粗いマイクロマニピュレーターを使用して、鈍い参照電極をハエのオセリを通して頭嚢にそっと挿入します。ハエがまだ健康に見え、触角を動かしていることを確認してください。録音に値する準備は素晴らしくなければなりません。
次に、鋭い記録微小電極をゼリーでコーティングされた開口部から左目に打ち込みます。それが組織に入るとき、電極の先端の位置は、その反射率パターンによって明らかになるはずです。壊れやすい電極の先端を完璧にガイドしないと破損し、非常に困難です。
記録される細胞の種類に応じて、ハエの頭の向きはわずかに異なるはずです。電極を所定の位置に置いた状態で、微小電極アンプの電源を入れます。次に、冷光源をオフにし、主電源からプラグを抜き、中央のアースに接続して、グランドループによる電気ノイズを最小限に抑えます。
次に、カルダンアームシステムがフライの周りで自由に動けるようにグースネックライトガイドを調整します。次に、部屋の照明を消して、フライの準備を比較的暗い場所に置きます。次に、目の記録電極の抵抗を測定します。100〜250メガオームでなければなりません。
次に、アンプを電流クランプまたはブリッジに設定し、電極間の電圧をゼロにします。フライが数分間暗順化された後、ピエゾステッパーを使用するか、微解像度ノブを軽く回転させて、0.1〜1ミクロンステップで記録電極の先端を目に打ち込みます。
各ステップで、1〜10ミリ秒のライトフラッシュで目を刺激します。光が点滅するたびに、電圧またはERGが短時間低下します。