脳スライスにおける小児性核ニューロンからのガンマバンド振動の記録

シ

ナプス遮断薬を含む aCSF に沈められた矢状脳切片による電気生理学的セットアップから始めます。

このセクションには、ニューロンが豊富な PPN 領域が含まれています。

シナプス遮断薬は、さまざまなニューロンの興奮性および抑制性受容体および膜ナトリウムチャネルを阻害し、それらの干渉を防ぎます。

パッチピペットにカリウムが豊富な溶液を充填し、記録電極とアンプに接続されたホルダーに挿入します。

目

詰まりを防ぐためにピペットに陽圧を加え、PPNニューロンの近くに配置します。

負の吸引を加えてニューロン膜としっかりと密閉し、膜が壊れるまでこの吸引を続けます。

正の電流パルスを供給して電圧依存カルシウムチャネルを開き、カルシウムイオンの侵入を可能にします。

これにより、ガンマバンド振動が誘発され、ニューロンを完全に興奮させることなく覚醒に不可欠な低レベルの興奮

が誘発されます。

これらの信号を記録ピペットで記録し、ガンマバンド振動を監視します。

この手順では、スライスを浸漬チャンバーに移し、その上にスクリーンを置いてスライスを押さえ、選択した受容体拮抗薬を含む酸素化aCSFで毎分1.5ミリリットルで灌流します。

固有の膜の特性を分離するために、あなたがする必要があるのは、細胞の周りの高速シナプス伝達をブロックし、活動電位を生成する能力もブロックすることです。したがって、活動電位をブロックするには、シナプス遮断薬とテトロドトキシンまたはTTXを使用する必要があります。そうすれば、パッチを当てている細胞がこれらの特性を生成する細胞であり、シナプス入力がそれらの原因となるものはなく、それが私たちがここで研究しているものです。

その後、記録パッチピペットに細胞内高カリウム溶液を充填します。ピペットをヘッドステージホルダーに挿入します。次に、ピペットホルダーに接続された1ミリリットルのシリンジを使用して、小さな陽圧を加えます。4倍対物レンズと近赤外差分干渉コントラスト光学系を使用して、上小脳柄の背側にあるPPN核を見つけます。

機械式マイクロマニピュレーターを使用して、記録ピペットをPPN核までゆっくりと下げます。次に、記録ピペットを、花柄の後端のすぐ背側にあるPPNコンパクト部に配置します。40倍の水浸レンズを使用して、記録ピペットをPPNニューロンに接触させ、負の吸引をすばやく適用して細胞とのシールを形成します。

電圧クランプシールソフトウェアを使用して、負吸引中のピペット抵抗を監視します。次に、ゆっくりと負圧を上げます。ピペットの抵抗値が80〜100メガオームに達したら、保持電位をマイナス50ミリボルトにすばやく変更し、負圧を解放します。

細胞膜が破裂し、細胞全体の構成で電気的アクセスが達成されるまで、負圧を連続的に適用します。吸引前の抵抗は低いです。この場合、2.5メガ