ラットの複数の部位からの脳活動のin vivo電気生理学的記録

頭

蓋骨を露出させた定位フレームに固定された麻酔をかけたラットから始めます。

頭

蓋骨の基準点を使用して、目的の座標を調整し、マークします。

マークされた位置に穴を開けます。

破片を取り除き、脳の外層を切り開きます。

乾燥を防ぐために、頻繁に生理食塩水で穴を洗い流してください。

電極をサポートするために追加の穴とアンカーネジを開けます。

参照電極と電気生理学的記録電極を取り付けます。アクリル樹脂を塗布して固定します。

脳内のマルチターゲット位置に応じて、タングステンマイクロワイヤー電極をフレームに配置します。

複数の電極により、複数の標的部位からの脳活動を同時に記録できます。

頭蓋骨の基準点を使用して、タングステンマイクロワイヤー電極を配置します。

それらを脳にそっと挿入します。

脳の活動を検出するように記録ソフトウェアを設定します。

電極を目標の深さまで下げ、データ記録を開始します。

顕微鏡下で、標準的な定位ラットアライメントツールを使用して、指定された先端をブレグマに校正し、ツール上のブレグマとラムダの指定されたポイントが同時に頭蓋骨に接触するまで切歯バーを調整します。カニューレ付きの定位固定保持ホルダーを使用して、カニューレに合わせて校正し、頭蓋骨上のすべてのドリル穴の位置を計算します。

次に、頭蓋骨を注意深く引っ掻くか、外科用カラーマーカーを使用して、ドリルで開ける穴の位置に印を付けます。次に、マイクロドリルを使用して、直径約1ミリメートルのすべての穴を慎重に開けます。STN と SNr の場合は、約 2 ミリメートル x 3 ミリメートルの共通穴を開けます。

細いカニューレを1つ取り、先端を曲げて2つのフックを形成します。次に、フックを使用してドリル穴から破片を取り除き、共通の STN/SNr 穴の硬膜を慎重に切断して取り外します。その後、ドリル穴を生理食塩水で洗い流します。

脳と硬膜の乾燥を防ぐために、15分ごとに生理食塩水をドリル穴に一滴塗布します。次に、マイクロドリルとそれに合わせたステンレス鋼のマイクロネジを取ります。穴を開け、小脳の上の基準硬膜外電極のドリル穴の間にマイクロネジをねじ込みます。

次に、電極の先端を細いピンセットでガイドし、頭蓋骨の真下のドリル穴にスライドさせます。すべての硬膜外電極を2液型歯科用アクリルで固定します。ブレグマポイントを覆ったり、一般的なSTN / SNr穴に影響を与えたりしないように注意してください。

次に、タングステンマイクロワイヤー電極を備えた準備したホルダーを定位固定装置フレームに挿入します。STNを標的とすることを目的としたブレグマに対して最も腹側の電極を校正します。共通のSTN / SNr穴の上の計算された位置に調整し、電極を脳まで下げます。

タングステンマイクロワイヤー電極が脳内にスムーズに入ることを確認してください。この手順では、バンドパスフィルターなどの記録ソフトウェアをセットアップし、生データ信号を増幅します。次に、適切な設定でオンラインの LFP とスパイク フィルターを使用します。

すべてのフィルターには、バターワースタイプのフィルターを使用します。オンライン スパイク ソートのスパイクしきい値を設定します。ほとんどの記録ソフトウェアでは、信号がソフトウェアによってスパイクとしてマークされるしきい値を超える振幅値であるスパイクしきい値を設定できます。次に、タングステンマイクロワイヤ電極をSTNの1mm上までゆっくりと下げ、必要に応じて信号が安定するのを待ちます。