マウスの嗅覚ニューロンの穿孔パッチクランプ記録

遺伝子操作マウスの切断された頭を考えてみましょう。鼻の嗅覚上皮には、蛍光色素タグ付き臭気受容体を持つ嗅覚ニューロン(OSN)が含まれています。

皮膚を取り除き、頭を解剖して、嗅覚上皮が付着した中隔を分離します。

上皮を分離して記録チャンバー内に固定します。

蛍光顕微鏡を使用して、標識された受容体を検出して、OSNの樹状突起ノブを標的とします。

膜穿孔性抗生物質であるナイスタチンを含む細胞内溶液を入れた記録ピペットを持参してください。

ピペットの目詰まりを防ぐために陽圧を加えます。ピペットを上皮に挿入し、OSNに近づきます。

負圧に切り替えて、細胞膜とシールを形成します。電流を流して膜を静止電位に維持します。

ナイスタチンは膜に穴を開け、細胞内イオン電流の測定を可能にします。

臭気刺激剤を含むピペットをOSNの近くに配置します。臭気受容体に結合する覚醒剤を放出し、イオンチャネルの開放を引き起こしてイオンの流入を可能にします。結果として得られる電気生理学的信号を記録します。

このプロトコルでは、生後2〜4週間のマウスを利用可能にします。本発表では、OR/IRES/tauGFPを発現するマウスを用いる。

OR/IRES/tauGFP マウスを使用することにより、目的の OR を発現するすべてのニューロンが GFP で標識されます。この方法は、すべてのゾーンで表されるORに使用できます。ただし、背側ゾーンで発現したORの解剖と記録は容易になります。

マウスを麻酔し、次に首を切ることから始めます。

このプロトコルの結果は、解剖の質によって異なります。これらの解剖手順は、できるだけ短く、正確でなければなりません。

手術を開始するには、解剖はさみを使用して背側に沿って縦方向に切り込みを入れます。皮膚を引き離して取り除きます。次に、下顎に沿って切り、歯と平行に冠状に切り込みを入れます。したがって、上切歯を取り除きます。次に、頭の周り、目の後ろに冠状の切り込みを入れます。後頭を捨て、前部を氷のように冷たいリンゲル病に移します。

次に、解剖顕微鏡下で、5〜10分以内に中隔を分離します。腹側に沿って縦方向の切り込みから始めます。次に、鼻腔の背側に沿って背骨を縦方向に切断します。

次に、骨と口蓋のほとんどを取り除きます。単離された中隔と付着した上皮を、室温で酸素化されたリンゲ病の容器に移します。5分以内に、録音前の最終準備をします。

溶液は温かすぎてはいけません、そうしないと製剤が損傷しているように見えます。記録のために神経上皮にアクセスするには、まず鉗子で下にある中隔から上皮を剥がします。次に、マイクロバンナはさみを使用して、中隔の前端を切断して上皮を放出します。

次に、鋤鼻器官を慎重に取り除きます。背側に付いているところを切り落とします。単離された上皮は、粘液側を上にして記録チ