繊維測光法による自由自在に動くマウスの神経活動の記録

光ファイバーカニューレが埋め込まれた自由に動くマウスから始めます。

光ファイバーパッチコードの一方の端をカニューレに接続し、もう一方の端を励起光源に接続します。

マウスは、視床

下部外側領域またはLHAニューロンで緑色の蛍光色素タグ付き遺伝的にコードされたカルシウム指示薬(GECI)を発現します。

移植された光ファイバーは、LHA軸索が終端する外側手頭、またはLHb領域に接触します。

GECIを最適な励起波長で励起し、ベースライン信号を記録します。

次に、マウスに繰り返しエアパフを適用して、嫌悪的なストレス反応を呼び起こします。

この刺激は、LHA軸索終末の活動電位を誘発し、電位依存性カルシウムチャネルを開き、カルシウムの流入を可能にします。

細胞内カルシウムイオンはGECIに結合し、緑色蛍光発光を増加させるコンフォメーション変化を誘発します。

光信号を可視化します。

マウスのエアパフに応答した蛍光の増加は、嫌悪シグナルの伝達におけるLHA-LHb経路の役割を確認します。

パッチ

コードの繊維の遠位端を目で、ミニファイバー顕微鏡で検査することから始めます。繊維の表面に傷がある場合は、細かいグリットの繊維研磨フィルムを使用して繊維を再研磨してください。次に、パッチコードの遠位端を70%エタノールと綿先のアプリケーターで洗浄します。70%エタノールと綿先アプリケーターを使用して光ファイバーカニューレを洗浄します。

黒いシュリンクチューブで覆われたセラミックスプリットスリーブを使用して、パッチコードのフェルール端を埋め込まれたファイバーに接続します。接続中は、スリーブがしっかりと締まっていることを確認してください。動物が数分間回復するまで待ってから、光信号の記録を開始して実験を実行します。録音中は、高品質の録音を確保するためにライブ トレースを注意深く監視し、スリーブが十分にきつくないことを示す信号のジャンプに注意してください。