マウス脳スライスにおける再プログラムニューロンの電気生理学的記録

固定化された遺伝子操作マウスの冠状スライスを、酸素化バッファーで灌流した記録チャンバーに取ります。

スライスには線条体領域が含まれており、介在ニューロンマーカーと蛍光タンパク質発現によってマークされたオリゴデンドロサイト前駆細胞から再プログラムされた介在ニューロンがあります。

細胞内溶液に浸した電極からなる記録ピペットを組み立てます。

蛍光介在ニューロンを顕微鏡的に同定する。

ピペット内の正圧を維持し、膜に接触して標的介在ニューロンに向かって前進させます。

負圧を加えて高抵抗シールを形成します。

負圧パルスを印加して膜を破壊し、セル全体の構成を確立します。

介在ニューロンの膜電位を一定の負の値に維持します。

短い増分電流を印加し、イオンチャネルを開き、膜電位を変化させ、活動電位をトリガーします。

最終的に、膜は静止電位に戻ります。

電流注入に応答して膜電位のこれらの変化を観察し、ニューロンの成熟と再プログラミングの成功を示します。

1つの組織切片を電気生理学用の記録チャンバーに移した後、ガラスピペットを記録電極に取り付け、溶液に降ろします。電極の抵抗を再確認してください。次に、先端が詰まらないように電極にわずかな正圧を保ちながら、ピペットで再プログラムされたセルにゆっくりと近づき、パッチを当てる前にセルがGFP陽性であることを確認します。

セルにパッチを当てたら、セルをマイナス60ミリボルトからマイナス70ミリボルトの電流クランプに維持し、マイナス20からプラス90ピコアンペアの500ミリ秒の電流を10ピコアンペア刻みで注入して活動電位を誘導します。これは、ニューロンの成熟と再プログラミングの成功を示しています。