Ex Vivoラット結腸における結腸求心性神経からの電気生理学的記録

バランスのとれた電解質溶液中に固定化されたマウス結腸セグメントを含む電気生理学的セットアップから始めます。

結腸には、結腸から脳に信号を伝達する事前に解剖された結腸求心性感覚神経枝を備えた露出した主要な骨盤神経節があります。

結腸は、生理食塩水注入用の三方弁で両端がカニューレされています。

記録電極を充填し、求心性神経の近くに配置します。

穏やかな吸引を加えて神経を電極に引き込み、しっかりと密閉します。

ベースラインの神経電気信号と結腸の内圧を監視します。

生理食塩水を結腸に継続的に注入しながら、出口カニューレの蛇口を閉じます。

これにより、結腸内の圧力が徐々に上昇し、結腸が膨張し、求心性神経が刺激されます。

神経信号と結腸圧を再記録します。

圧力の増加に伴う神経信号の段階的な上昇は、求心性神経刺激を確認します。

解剖

顕微鏡下で事前に引き抜かれたガラスピペットを検査します。一対の鉗子で電極の先端を壊し、記録する神経の直径と互換性のあるサイズになるようにします。その後、先端を明るいフレアの近くに置いて面取りします。

この方法論を初めて使用する人は、神経のサイズに合わせて電極の先端を面取りするのが難しいと感じるかもしれません。

次に、面取りされた電極を電極ホルダーに入れます。次に、10ミリリットルのシリンジをホルダーのサイドポートに接続して、電極に負圧または正圧を加えます。その後、ホルダーをバイオアンプのヘッドステージに接続し、ヘッドステージをマニピュレーターに取り付けます。

これに続いて、電極を組織浴に移動し、ホルダーの銀線に接触するまで、穏やかな吸引を加えて電極にクレブス溶液を充填します。次に、電極の先端を神経の切断端に近づけ、負圧を加えて神経を電極に吸い込みます。次に、さらに負圧を加えて、神経の約1ミリメートルが電極に引き込まれ、しっかりと密閉されます。

次に、バイオアンプの電源を入れ、フィルターを300〜3,000ヘルツに設定します。オシロスコープの信号を監視し、神経信号と管腔内圧信号をスパイクデータ処理ソフトウェアに記録します。次に、出口カニューレの三方タップを閉じながら、管腔内に継続的に注入することにより、結腸のランプ拡張を適用します。水銀柱が60ミリメートルに達するまで管腔内圧を監視します。