脳血管内皮細胞におけるミトコンドリア機能の評価

培地中の脳血管内皮細胞またはCVE細胞から始めます。

CVE細胞は、脳の血管の内側を覆うエネルギーを必要とする細胞であり、脳の生理学に不可欠です。

細胞を細胞外フラックス細胞培養プレートに入れます。細胞付着のためにインキュベートします。

培地を、所望のpHの細胞外フラックスアッセイ培地に交換します。

pHを維持するために二酸化炭素なしでインキュベートします。

次に、センサーと底板を含む細胞外フラックスセンサーカートリッジを取ります。

プレートに校正溶液を加え、二酸化炭素なしでインキュベートしてセンサーを水和させます。

これらのセンサーは、ミトコンドリアの活動を示す細胞外環境における酸素濃度の変化を測定できます。

次に、カートリッジをバイオアナライザーマシンにロードし、センサーを校正します。

底板を細胞を含むプレートに交換します。

CVE細胞のミトコンドリア機能を測定します。

適切な数の継代培養の後、ウェルあたり80マイクロリットルの完全培地に1.6 x 10⁴細胞を96ウェルの細胞外フラックス細胞培養プレートに播種し、プレートを5%二酸化炭素を含む摂氏37度のインキュベーターに入れます。

ミトコンドリア機能評価アッセイの前日に、細胞外フラックスセンサーカートリッジに150マイクロリットルの細胞外フラックスキャリブレーション溶液を水和させ、二酸化炭素なしで摂氏37度でプレートを一晩インキュベートします。

翌朝、プレートウォッシャーステーションを使用して、細胞培養培地をpH 7.0の細胞外フラックスアッセイ培地に変更し、二酸化炭素なしで摂氏37度で細胞を30〜60分間インキュベートします。細胞が平衡化したら、水和カートリッジをバイオアナライザーにロードし、[開始]ボタンをクリックしてキャリブレーションを開始します。

キャリブレーションの最後に、カートリッジのロック解除プロンプトをクリックしてカートリッジの底板を取り外し、細胞プレートをロードし、データファイルを開いてバイオアナライザーからレート値を取得し、スプレッドシートファイルにエクスポートします。