Ex Vivoマウス空腸セグメントにおける腸間膜求心性神経活動の記録

小腸の一部であるマウス空腸の解剖部分を電解質溶液に浸し、ピンで固定した記録チャンバーから始めます。

空腸セグメントには、空腸から脳に信号を伝達する、事前に解剖された腸間膜求心性神経を備えた周囲の脂肪組織が含まれます。

このセグメントは、溶液の流れのためにチャンバーの流入ポートと流出ポートに接続されています。

マイクロマニピュレーターと記録ユニットに接続された吸引電極を取ります。

吸引電極に電解質溶液を満たし、腸間膜求心性神経の近くに配置します。

穏やかな吸引を加えて、周囲の脂肪組織で神経を引っ張り、しっかりと密閉します。

流入を維持しながら流出口を閉じて、空腸セグメントの内圧と膨張を徐々に増加させます。

これにより、空腸の周りの腸間膜求心性神経が興奮し、電気信号が生成されます。

空腸圧の変化に反応した求心性神経活動を記録します。

この手順では、マイクロマニピュレーターを使用して、吸引電極の先端を臓器浴に下げます。次に、臓器浴からクレブス溶液をそっと吸引し、電極の先端がクレブス溶液に浸るようにします。クレブス溶液が吸引電極内のワイヤー電極を覆っていることを確認してください。

次に、吸引電極の先端を切断された求心性神経鎖のすぐ隣に配置し、切断された神経鎖をその全長にわたって毛細血管に引き込みます。電極の先端を脂肪組織に向かって操作し、プランジャーでガラス毛細血管に吸引し、それによって毛細血管内の神経を臓器浴の内容物から機械的に密閉します。

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心性神経活動の記録を検証するには、出力ポートを閉じて腸セグメントの圧力を徐々に上昇させることにより、求心性発火のランプ膨張誘発性増加を実行します。3 つの連続したランプ膨張により再現性のあるマルチユニット放電が得られる場合にのみ、目的の実験プロトコルを実行してください。