電気生理学的記録のためのマウス脳への電極アセンブリの埋め込み

麻薬をかけたマウスを、体温を維持するために加熱パッドを含む定位固定フレームに固定します。

目の乾燥を防ぐために潤滑剤を塗布し、水分補給を維持するために電解質を皮下に注入します。

頭皮の毛を取り除き、その部分を消毒し、鎮痛剤を皮下に注入して痛みを軽減します。

蓋骨を露出させる切開を行い、頭蓋骨を洗浄して解剖学的ランドマークを目に見えるようにし、脳領域を識別します。

歯科用接着剤を塗布し、電極の埋入を助けるために硬化ライトを使用して硬化させます。

海馬と小脳の上に穴を開け、定位固定装置にホルダーを使用して電極アセンブリを取り付けます。

バイポーラ電極は海馬の活動を記録し、参照電極は小脳からベースライン活動を取得します。

電極を挿入し、歯科用セメントでアセンブリを固定し、ホルダーから取り外します。

電解質溶液と鎮痛剤を再度投与します。

電気生理学的記録を行う前に、マウスが完全に回復するまで待ちます。

手術を進める前に、8週間齢のVGAT-Creマウスの体重を記録します。次に、動物を誘導チャンバーに入れて麻酔を誘発します。麻酔をかけたマウスを摂氏37度の加熱パッドの上に置きます。フィードバック制御温度システムを使用する場合は、手術中の温度監視のために温度プローブを動物の直腸に挿入します。手術を開始するには、吸入麻酔の流れをノーズコーンに向け直し、前歯を切歯バーにそっと置き、コーンを鼻に動かして動物を定位固定フレームに取り付け、イヤーバーを耳に入れて定位固定フレームに

動物の頭が水平で中央にあり、少し探っても動かないようにしてください。動物がマウントされたら、水分補給のために0.5ミリリットルのノルモソールをマウスに注入し、角膜の乾燥を防ぐために眼潤滑剤を塗布します。後肢のつま先をつまんで麻酔の深さを監視します。動物に離脱反射がない場合は、手術領域の周りのマウスの頭皮の毛を取り除きます。完了したら、エタノールとヨウ素を交互に塗布してきれいな皮膚領域を3回消毒し、0.05ミリリットルの0.25%ブピバカインを皮下注射します。

メスを使って頭蓋骨を切開し、頭蓋骨を露出させる手術用ハサミで皮膚の一部を切り取ります。綿棒で下にあるすべての組織から頭蓋骨をきれいにする前に、皮膚を脇に押し出します。滅菌綿棒を使用して過酸化水素で頭蓋骨を洗浄し、頭蓋骨の縫合糸、ブレグマ、ラムダを見えるようにします。定位的に取り付けられたドリルを使用して、ドリルの先端をブレグマとゼロのx、y、およびz座標に移動し、次に、ドリルを上げてラムダに移動し、その座標を決定し、ヘッドが水平であるかどうかを判断します。

蓋骨を完全に乾燥させた後、アプリケーターでセルフエッチング歯科用接着剤を1滴塗布します。歯科用接着剤を歯科用UVライトで40秒間硬化させる前に、60秒待ちます。光沢のある表面は、接着剤が頭蓋骨と効果的に架橋されていることを示します。0.031 インチのドリルビットを使用して、脳に穴を開けないように、毎分 5,000 回転 (RPM) で頭蓋骨に 2 つのボアホールを慎重に両側に開けます。生理食塩水を一滴垂らして、バリ穴の穴あけを強化します。海馬深さ電極の移植には、前突起から後方 3 ミリメートル、外側 3 ミリメートルにドリルで穴を開けます。

脳の上、ラムダの後ろ、ブレグマから後方6ミリメートル、外側0ミリメートルの参照電極用のバリ穴を1つ開けます。次に、組み立てられた電極を備えた6ピン台座を定位フレームの電極ホルダーに取り付けます。対応するバリ穴の上に電極を合わせることにより、ヘッドセットをゆっくりと下げてナビゲートし、2つのバイポーラ電極の先端を左右の海馬のバリ穴の真上に配置し、必要に応じて、参照電極を調整して、小脳の上の穴の上にホバリングします。

海馬ツイスト電極が穴の真上にあるら、z軸をゼロにし、電極を左右の海馬にマイナス3ミリメートルまでゆっくりと下げ、参照電極を小脳の上の穴に導きます。ミキシングボウルで粉末と液体を混合して歯科用セメントを準備し、頭蓋骨表面、電極、頭蓋骨表面と台座の底の間のスペースを歯科用セメントで覆います。

セメントが乾いて固まったら、電極ホルダーを定位アームから取り外し、アームを上げてホルダーを台座から取り外します。マウスにケトプロフェンとノルモソールを皮下投与した後、動物を定位フレームから取り外して、動物をビバリウムケージ内の加熱パッド上に移動します。完全に目覚めたら、1匹の動物をビバリウムケージに戻し、動物に柔らかい食べ物を与え、手術後72時間まで毎日体重減少を監視します。