ショウジョウバエの光受容体における長期にわたる脱分極性残電位(PDA)の調査

白い目のショウジョウバエをレコーディングアリーナのホルダーに確保します。

光源をフライの近くに配置します。

ハエの背中に接地電極を埋め込みます。

記録電極をハエの目の外周、光色素を含む網膜光受容細胞の近くに挿入します。

ハエを短時間暗く適応させます。これにより、光色素の光活性化型であるメタロドプシンが、その不活性型であるロドプシンに変換されます。

高輝度のオレンジ色の光パルスを適用します。これにより、残りのメタロドプシンがロドプシンに変換されます。

次に、ブルーライトパルスを適用します。青色光はロドプシンをメタロドプシンに変換し、シグナル伝達カスケードを開始し、特定のイオンチャネルを開きます。

これにより、青色光が除去された後でも、継続的な正イオン流入と持続的な脱分極、つまり電極によって記録される長時間の脱分極残電位 (PDA) が誘発されます。

次に、オレンジ色の光パルスを再適用して、メタロドプシンをロドプシンに変換します。

これにより、シグナル伝達カスケードが停止し、PDAが終了し、光受容体膜が再分極します。

フライホルダーをマグネットブロックの上の暗いファラデーケージに置き、フライがライトガイドの端から約5ミリメートル離れていることを確認します。マイクロマニピュレーターを使用して、記録電極をハエの目の上に置き、接地電極をハエの背中上部の上に置きます。次に、マイクロマニピュレーターを使用して接地電極をフライの背面に挿入します。

記録電極をハエの目の外周に挿入し、できればマイクロマニピュレーターを使用します。ファラデーケージを閉じ、部屋の照明を消して、5分間暗闇に適応できるようにします。パラメータは、パルス持続時間 500 メートル/秒、パルス間隔 60 秒

、パルス数を 6 に設定して開始します。

PDAを測定するには、マスターレートパルスジェネレータをトレインモードに設定します。次に、オレンジ色のフィルターを使用して最大強度の5秒間の光パルスを与えます。電圧応答を確認します。オレンジ色のフィルターを広帯域青色のフィルターに交換し、最大強度で5秒間の光パルスを3回与えます。電圧応答を確認します。

暗闇の中で少なくとも60秒待ちます。青色のフィルターを前のオレンジ色のフィルターに置き換えます。次に、60秒間隔で5秒の光パルスを2回与えます。電圧応答を確認します。