急性海馬切片における神経野興奮性シナプス後電位の記録

マウス海馬スライスを人工脳脊髄液(aCSF)で満たされた浸漬チャンバーに入れます。

スライスを保持メッシュで固定し、動きを防ぎます。

酸素化された aCSF を継続的に循環させて、ニューロンの生存率を維持します。

基準電極を取り付けて、安定した電圧基準を提供します。

刺激電極と記録電極を海馬のCA1ピラミッド層と一直線に平行に配置します。

電気パルスを印加します。

これらのパルスはニューロンを刺激し、電位依存性イオンチャネルを開き、正イオンが流入し、活動電位を引き起こします。

これらの活動電位はニューロンに沿って伝播し、興奮性神経伝達物質のシナプス間隙への放出を誘導します。

神経伝達物質はシナプス後ニューロンの特定の受容体に結合し、正イオンの流入を可能にし、膜電位、つまり興奮性シナプス後電位(EPSP)の変化をもたらします。

記録電極は、記録領域(フィールドEPSP)内のニューロン集団からEPSPを測定します。

レンズクリーニングペーパーの小片と、U字型のプラチナワイヤーに固定されたナイロンメッシュを、浸漬スライスチャンバーに数分間事前に浸します。その後、U字型の白金線を取り外します。リサイクルのスイッチを切り、レンズクリーニングペーパーにスライスを置きます。次に、すぐにスライス保持メッシュをスライスの上に置きます。

ポンプのスイッチを入れ、対物レンズをACSFに浸さずにスライスを30分間平衡化させます。その間に、記録電極にACSFを充填し、ピペットホルダーに取り付けます。

次に、テストされたエポキシ絶縁タングステン刺激電極をマニピュレーターホルダーに入れ、基準線をスライスチャンバーに入れます。チャンバーに2番目の参照電極を追加し、記録電極のヘッドステージの参照ソケットに接続します。

アンプ制御ソフトウェアで、ゼロクランプモードボックスをクリックし、出力ゲインリストボックスをダブルクリックします。ゲインを 100 に選択します。High-Pass Filter Box ベッセルをダブルクリックします。3 キロヘルツを選択し、ローパス フィルター リスト ボックス AC をダブルクリックして 0.1 ヘルツを選択します。

記録ソフトウェアで、[オープンプロトコルの取得]をクリックします。エピソード刺激と、10〜20キロヘルツで50〜100ミリ秒の増幅電位のデジタル化を可能にし、エピソード記録の開始から10ミリ秒後に刺激アイソレータを自動的にトリガーする設定を持つプロトコルを選択してください。

刺激電極と記録電極をピラミッド層と一直線に平行に配置します。続いて、[Acquire Edit Protocol] をクリックし、ポップアップ ウィンドウで [Trigger] タブを選択します。[トリガーソース] ボックスをクリックし、トリガーソースとして [スペースバー] を選択します。次に、[OK]ボタンをクリックし、[記録]ボタンをクリックして取得を開始します。

刺激アイソレータソフトウェアで、電圧制御ボックスをクリックし、ゼロを入力します。[ダウンロード] ボタンをクリックします。その後、「録画ソフトウェア」ウィンドウをクリックし、スペースバーを押します。このサイクルを繰り返して、1,000 から 8,000 までの値を順番に入力します。刺激強度を FEPSP 勾配値と相関させ、FEPSP 勾配の最大値の 40% を得るために必要な刺激強度を決定します。[電圧制御]ボックスをクリックし、決定した値を入力します。次に、「ダウンロード」ボタンをクリックします。

記録ソフトウェアで、[停止]ボタンをクリックし、[取得]メニューをクリックします。[プロトコルの編集(Edit Protocol)] をクリックし、ポップアップ ウィンドウで [トリガー(Trigger)] タブを選択します。その後、[トリガーソース]ボックスをクリックし、トリガーソースとして[内部タイマー]を選択します。[OK]ボタンをクリックし、続いて[記録]ボタンをクリックして、60秒ごとに電位の自動記録を開始します。30〜60分後に[停止]ボタンをクリックします。

記録ソフトウェアで、[オープンプロトコルの取得]をクリックし、ベースライン記録と同じプロトコルを選択します。[OK] ボタンをクリックし、[記録] をクリックします。フィールドポテンシャルレコーディングを2〜4時間自動的に実行し続けます。終了したら、 停止 ボタンをクリックして録音を終了します。