マウス初代小脳顆粒ニューロンにおける神経損傷のモデル化

マウス初代小脳顆粒ニューロンの培養から始めます。

興奮性神経伝達物質受容体アゴニストであるN-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)とコアゴニストであるグリシンを高濃度で添加します。培養物をインキュベートします。

NMDA とグリシンは NMDA 受容体のそれぞれの部位に結合し、過剰刺激を引き起こし、カルシウムイオンの大量流入を引き起こします。

細胞内カルシウムの増加はカルシウム依存性ホスホリパーゼを活性化し、細胞膜リン脂質を分解し、膜損傷を引き起こします。

さらに、細胞内カルシウムは、細胞タンパク質を分解するプロテアーゼを活性化します。

シウムレベルの上昇はミトコンドリアストレスと断片化も誘発し、活性酸素種(ROS)の放出につながり、酸化ストレスを引き起こします。

さらに、細胞内カルシウムはDNaseを活性化し、ROSとともにDNA損傷を引き起こし、最終的にはニューロン死を引き起こします。

NMDAとグリシンを含まない新しい培地に置き換えて、シグナル伝達カスケードを停止します。

NMDA 誘発性神経損傷モデルは、さらなる分析の準備が整いました。

NMDAでニューロンの興奮毒性を誘導するには、in vitroで7日後、小脳顆粒ニューロンを100マイクロモルのNMDAと10マイクロモルのグリシンで1時間処理します。次に、培地を、処理を行わずに並行培養からのコンディショニング培地と交換します。この濃度により、処理後 24 時間で 50% の細胞死が発生します。