新生児マウス脳におけるマウスサイトメガロウイルス分布を分析するための脳室内注射

強化

された緑色蛍光タンパク質を発現するように遺伝子操作されたマウスサイトメガロウイルスの懸濁液を取り、視覚化を可能にします。

懸

濁液を針付きの注射器にロードします。

次に、マウスの子犬を氷の上に置いて麻酔します。

子犬の頭の注射部位を特定します。

針

が脳内の側脳室、脳脊髄液、またはCSFで満たされた空洞に到達するまで、頭蓋骨表面に垂直に針を挿入します。

側脳室に懸濁液を注入します。

子犬が回復するのを待ちます。

注入されたウイルスは心室CSFを循環し、辺縁領域の上衣細胞と脈絡叢の上皮細胞に到達します。

ウイルスはこれらの細胞の表面受容体に付着し、内在化し、複製を受け、細胞から細胞へと広がり、脈絡叢、辺縁領域、および脳室下ゾーンに急性感染症を確立します。

まず、10マイクロリットルの注射器と27ゲージの針を70%アルコールで滅菌します。次に、注射器のプランジャーを慎重に引っ張って、5マイクロリットルのマウスサイトメガロウイルス注射液または蛍光マイクロビーズを針にロードします。

P0.5新生児マウスを氷上に3〜4分間置いて麻酔および固定した後、つま先ピンチ応答法を使用して麻酔の深さを決定します。矢状縫合糸の外側約0.7〜1.0ミリメートル、新生児ブレグマから尾側0.7〜1.0ミリメートルの位置に、麻酔をかけたマウスの注射部位を無毒の実験用ペンでマークします。この図は、サイトをより詳細に示しています。

参考までに、針の先端から2ミリメートルを無毒のマーカーでマークします。次に、マークされた注射部位の頭蓋骨表面に垂直に、深さ2ミリメートルの針を挿入します。次に、頭皮を開かずに5マイクロリットルのマウスサイトメガロウイルスを側脳室にゆっくりと注射します。

マウスの別のグループに、蛍光マイクロビーズを含む5マイクロリットルの溶液を同じ方法で注入します。注射後は、逆流を防ぐために針を10〜20秒間所定の位置に置いてください。次に、ゆっくりと針を抜きます。注射された動物を、動きと一般的な反応性が回復するまで、暖かい容器で5〜10分間回復させます。