マウス小脳顆粒ニューロンにおける活性酸素種誘発性ニューロン死のモデル化

マウス初代小脳顆粒ニューロンの培養を取ります。

酸素種またはROSである過酸化水素を含む培地を加え、短時間インキュベートします。

過酸化水素は細胞内に拡散し、反応性の高いフリーラジカルに変換されます。

これらのラジカルは脂質過酸化を誘導し、細胞膜の完全性を損ないます。

さらに、ラジカルは細胞タンパク質に酸化修飾を引き起こし、その機能を損ないます。

さらに、それらはDNA切断を誘発し、ゲノムの不安定性につながります。

ジカルはまた、ミトコンドリアを含む細胞内細胞小器官に酸化的損傷を引き起こします。

それに応答して、損傷したミトコンドリアはシトクロム c を放出し、アポトーシス プロテアーゼ活性化因子-1 に結合し、アポトソームの形成とプロカスパーゼ-9 の活性カスパーゼ-9 への変換を引き起こします。

カスパーゼ 9 は死刑執行者カスパーゼを活性化し、細胞タンパク質をさらに切断し、アポトーシス ニューロン死を引き起こします。

培地を新鮮な過酸化水素フリー培地に交換して、シグナル伝達カスケードを停止します。

ROS誘発性細胞死の場合は、ニューロンを75〜100マイクロモルの過酸化水素で5分間処理します。5分後、並行培養からコンディショニング培地に切り替えます。

過酸化水素は不安定であるため、24時間後に50%から70%の細胞死を誘発するレベルに濃度を最適化する必要があります。この濃度は通常75〜100マイクロモルです。