ショウジョウバエの幼虫を機械的に傷つけ、神経分節神経を誘発する。

ショウジョウバエの3齢幼虫を採取し、二酸化炭素を使用して麻酔します。

顕微鏡下で、腹側面を上に向けて幼虫を配置し、分節神経を視覚化します。

これらの神経には、体壁の筋肉を神経支配し、幼虫の動きを制御する運動ニューロンが含まれています。

これらのニューロンの軸索終末は筋線維と結合して神経筋接合部またはNMJを形成します。

ニューロンは筋線維上の受容体に結合する神経伝達物質を放出し、イオン流入を引き起こし、信号伝達を引き起こします。

鉗子を使用して、腹側キューティクルをつまんで分節神経を損傷し、それによって動きを阻害します。

傷した幼虫を幼虫の餌と一緒に寒天プレートに置き、生存を確実にします。

皿を皿に入れ、湿らせたペーパータオルで覆って水分を保ち、幼虫が回復できるように容器に保管します。

時間が経つにつれて、損傷は神経変性として知られる運動ニューロンの死につながり、NMJ が破壊されます。

各幼虫をCO₂麻酔装置に置きます。解剖顕微鏡下で、各幼虫をその背側に慎重に転がして、キューティクル全体の分節神経を視覚化します。

損傷する前にキューティクルを通して分節神経を視覚化するために、各幼虫を慎重に背側に転がすことが不可欠です。

口のフックから始めて、サイズ5の鉗子を幼虫の長さの約2分の1から2/3に配置します。位置決めしたら、サイズ5の鉗子で分節神経を含む腹側キューティクルの約3分の1をつまみます。幼虫の分節神経が損傷するようにするには、分節神経を押しつぶすのに十分な力を加えますが、キューティクルはそのままにしておきます。正しい力の量を決定するには、10匹の幼虫を粉砕し、5時間後の死亡率が50%未満であることを確認します。

損傷後、幼虫を約0.5グラムの酵母ペーストを含むフルーツジュース寒天プレートに慎重に移します。各幼虫を、その前端が酵母ペーストの上に来るように配置し、餌を与え続けます。酵母ペーストと10匹の負傷した幼虫を入れた寒天プレートを、100 x 15ミリメートルの空のペトリ皿の底に置きます。ペーパータオルが幼虫や寒天プレートに触れないように、ペトリ皿を湿らせたペーパータオルで覆います。次に、シャーレを密閉容器に入れ、室温で入れます。最後に、損傷後の指定された期間後に解剖のために幼虫を回収します。