EAEマウスモデルにおける蛍光色素を用いた血液脳関門破壊の決定

大きなデキストラン鎖に結合した緑色蛍光色素を含む溶液から始めます。次に、小さなデキストラン鎖に結合した赤色染料の溶液を加えます。

染料をよく混ぜて注射器に入れます。

この色素混合物を、眼窩後洞、目の後ろの静脈を通して麻酔をかけたマウスに静脈内注射します。

このマウスは実験的自己免疫性脳脊髄炎またはEAEを患っています。

この状態では、血液脳関門が乱され、脳の血管の内皮細胞間の密接結合が弱くなり、隙間が生じます。

マウスを完全に目覚めさせて運動性を取り戻し、染料が循環できるようにします。

小さなデキストラン鎖を持つ赤色の色素は、小さな隙間から脳組織に容易に拡散しますが、大きなデキストラン鎖に結合した緑色の色素は、損傷がひどい場合に拡散します。

脳組織内の各蛍光色素の量は、血液脳関門の破壊の程度と相関します。

デキストランストック溶液を調製するには、10ミリグラムの3キロダルトンのデキストランテキサスレッドを500マイクロリットルの0.9%塩化ナトリウム溶液に溶解し、5ミリグラムの10キロダルトンのデキストランAlexaFluor 488を250マイクロリットルの0.9%塩化ナトリウム溶液に溶解します。

デキストラン作業溶液の場合、注射の直前に、55マイクロリットルの10キロダルトンのデキストランAlexaFluor 488ストック溶液をシーリングフィルムにピペットで入れ、次に55マイクロリットルの3キロダルトンのデキストランテキサスレッドストック溶液を加えます。100マイクロリットルを混合して使い捨ての細かい注射器に集めます。

次に、麻酔をかけたマウスをテーブルの横向きに置きます。マウスが目覚める前に、100マイクロリットルの蛍光トレーサーをマウスに静脈内注射します。トレーサーを15分間循環させます。