マウス頭蓋顔面組織の免疫染色

神経堤細胞を含む固定マウス胚頭蓋顔面組織の凍結切片を行います。

非イオン性界面活性剤を含む緩衝液で切片を洗浄して、包埋培地を除去し、膜を透過処理して、細胞内標的へのアクセスを可能にします。

ブロッキング溶液を添加して、非特異的結合部位を飽和させます。

余分なブロッキング溶液を取り除きます。次に、転写因子や増殖マーカーなどの核抗原を標的とする一次抗体とインキュベートします。

バッファーで洗浄して、結合していない抗体を除去します。

蛍光色素結合二次抗体とインキュベートして、抗原結合一次抗体に結合します。

バッファーを使用して結合していない抗体を除去します。

蛍光核色素を含む退色防止培地を加え、カバーガラスで覆います。

色素は核を染色し、退色防止媒体はイメージング中の蛍光シグナルを保護します。

蛍光顕微鏡で切片を画像化して、核マーカーの発現と局在を評価し、神経堤細胞の増殖とシグナル伝達活動を示します。

スライドを0.1%PBSTで3回、それぞれ5分間すすぎ、OCTを洗い流し、切片を透過処理します。各スライドに200マイクロリットルのブロッキング溶液を加え、室温で30分間インキュベートします。次に、スライドをすすぎずにブロッキング溶液を取り除きます。ブロッキング溶液で希釈した100マイクロリットルの一次抗体を各スライドに加え、摂氏4度で一晩インキュベートします。

スライドを室温で10分間、PBSで3回すすぎます。ブロッキング溶液で希釈した100マイクロリットルの二次抗体を加え、光から保護した状態で室温で1時間インキュベートします。光から保護したまま、室温でPBSで10分間、PBSで3回すすぎます。スライドを取り付けるには、各スライドにDAPIを含む退色防止媒体を2滴加えます。カバーガラスで覆い、画像化の準備が整うまで摂氏4度で保管します。