ラットモデルにおける活動性HIV感染の確立

麻酔をかけたラットから始めて、坊主頭を消毒し、定位固定装置に固定します。

正中線を切開して頭蓋骨を露出させます。

頭蓋骨に2つの位置に印を付け、小さな穴を開けます。

レンチウイルスベクター内にエコトロピックHIV RNAを含むキメラウイルスを含むシリンジを定位固定装置に取り付けます。

針を穴に挿入し、脳の免疫細胞であるミクログリアを含む脳皮質細胞を標的にします。

ウイルスをゆっくりと注射して、皮質に均一に分布させます。

注射後、切開部を縫合し、その領域を消毒し、ラットを回復させます。

注射されたウイルスは脳細胞受容体と相互作用し、融合し、HIV RNAを細胞質に放出します。

RNAはDNAに逆転写され、細胞のDNAに組み込まれます。

感染した細胞はウイルス成分を発現し、新しいRNAとタンパク質を産生します。

これらは集合して新しいウイルスとして放出され、脳内のウイルス量を増加させ、活動的なHIV感染を確立します。

エコHIV EGFP注射は、ペダル反射に反応しないことを確認後、脳領域の毛を剃り、露出した皮膚を70%エタノールとクロルヘキシジン系スクラブで2回除菌します。ラットを定位固定装置で腹臥位に固定し、頭皮の正中線に沿って皮膚から5〜6センチメートルの切開を行います。

横方向0.8ミリメートルに1つの穴あけ位置と1.2ミリメートルの吻側からブレグマに1つの穴あけ位置をマークし、各頭蓋骨位置に直径0.4ミリメートルの穴を開けます。力価化されたEcoHIVレンチウイルス溶液の1ミリリットルあたり10〜6番目の形質導入単位を10マイクロリットルの注射注射器に1.04倍ロードし、注射器を定位固定装置に固定します。

針を1つの穴の表面に近づけ、針を穴に2.5ミリメートル挿入します。1マイクロリットルのウイルス溶液を毎分0.2マイクロリットルのウイルスの割合で注入します。すべてのウイルスが注入されたら、針を注射領域内に5分間放置してから、針がラットの頭蓋骨の外側になるまでゆっくりと針を引っ込めます。

4-0シルク糸縫合糸で皮膚切開部を閉じ、溶液を70%エタノールで滅菌します。次に、ラットを横臥するまで監視する加熱パッド付きの回復チャンバーに入れます。