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ニューロンで発現する痛みに敏感なイオンチャネルであるTRPV1受容体の高親和性アゴニストであるレシニフェラトキシン(RTX)の溶液から始めます。
麻酔をかけた成体マウスを取り、RTXを腹腔内に投与します。
この薬は体循環に入り、脊髄の近くにある感覚ニューロン細胞体のクラスターである後根神経節 (DRG) に到達します。
RTX は血液神経関門を通過し、TRPV1 を豊富に発現する DRG 内の小径感覚ニューロンと相互作用します。
RTXがTRPV1に結合すると、受容体が活性化され、ニューロンへの大量のカルシウムイオン流入が誘導されます。
細胞内カルシウムは、細胞膜のリン脂質、細胞タンパク質、およびDNAを分解する酵素を活性化し、最終的にはニューロン死につながります。
その後、皮膚を神経支配する小径の感覚ニューロンの末梢末端である表皮内神経線維(IENF)が変性し始めます。
この IENF の変性により、皮膚からの感覚入力が失われ、それによって小線維神経障害モデルが確立されます。
まず、個人用保護具を着用し、レシニフェラトキシンまたは RTX ストック溶液を作成する際に適切な予防措置を講じます。実験のために600マイクロリットルの1つのアリコートを生理食塩水で希釈し、残りを12マイクロリットルのアリコートに分けて保管します。試験マウスには、体重35〜40グラムの8週間齢の成体雄ICRマウスを使用します。マイクロインジェクションシリンジを使用して、RTX溶液を単回投与して腹腔内に投与します。次に、マウスの2番目のグループに、コントロールとして機能する同量のビヒクルを注入します。すべての注射を行った後、マウスを自宅のケージに収容し、餌と水にアドリブでアクセスできることを確認します。