局所レーザー損傷を用いたゼブラフィッシュの網膜変性および再生のモデル化

麻酔をかけた成体のゼブラフィッシュから始めます。

魚をシリコンピンホルダーに移し、合成ポリマーの層を塗布して目を滑らかにします。

次に、レーザーレンズを目の前に配置して、レーザー照準ビームを網膜に焦点を合わせます。

ゼブラフィッシュの目にレーザーを向け、網膜に損傷

レーザーは熱損傷と網膜光受容細胞の死を誘発し、数日かけて進行し、網膜色素上皮から外側の網状層まで広がる変性プロセスを開始します。

それに応えて、ミュラーグリア(MG)細胞は反応性グリオーシスを起こし、肥大型および増殖性になります。

その後、これらの細胞は幹細胞前駆細胞に脱分化します。

駆細胞は徐々に損傷部位に移動し、微小環境からの空間的および時間的手がかりに導かれて、数日かけて成熟した網膜細胞型に分化し、それによって網膜構造の再生を促進します。

400ミリグラムのトリカイン粉末を97.9ミリリットルのタンク水と2.1ミリリットルの1モルTBSに溶解して、麻酔薬のストック溶液を調製します。pH 9で1モルトリスでpH 7.0に調整します。作業溶液を作るには、トリカイン原液をタンク水で1〜25に希釈し、50ミリリットルをペトリ皿に移します。次に、ゼブラフィッシュを麻酔液に2〜5分間入れ、動かなくなり、外部刺激に反応しなくなるまで入れます。

各魚を手でカスタムメイドのシリコンピンホルダーに移してレーザー治療を行います。

適切な麻酔は、動物の健康と処置の成功にとって非常に重要です。したがって、調製したばかりのトリカイン溶液が極めて重要であり、水から出る時間は 10 分を超えてはなりません。

532ナノメートルのダイオードレーザーの出力電力を70ミリワット、パルス持続時間を100ミリ秒、空中直径を50ミクロンに設定します。次に、2%ヒドロキシプロピルメチルセルロースを1〜2滴目に塗布します。

メチルセルを目に塗布するときは、粘性のある溶液が鰓に付着しないように注意してください。

次に、2 ミリメートルの眼底レーザー レンズを使用して、レーザー照準ビームを網膜に焦点を合わせます。左目の視神経の周囲に4つのレーザースポットを配置し、未治療の右眼を内部制御として使用します。