アミロイドペプチド注入によるゼブラフィッシュ脳のアルツハイマー病モデルの確立

ガラス注入毛細管に、凝集

しやすい特性を持つ異常なペプチドである合成モノマーアミロイドペプチドの溶液を満たします。

キャピラリーをマイクロインジェクションホルダーに挿入します。

同時に、麻酔液の入ったシャーレにゼブラフィッシュを入れます。

魚に麻酔をかけたら、鉗子で横に持ち、頭を固定します。

2つの側板の接合部で魚の頭蓋骨に小さな切開を行い、ニューロンが豊富な前脳にアクセスします。

次に、切開部から毛細血管針を挿入し、アミロイドペプチド溶液を前脳に注入します。

ゼブラフィッシュを循環水の入った回収容器に移します。

前脳内では、アミロイドペプチドがニューロンの近くに蓄積します。

これらのペプチドは自発的に誤って折りたたまれてベータシートを形成し、ニューロンの周囲に凝集して有毒なアミロイドプラークを形成します。

これらのプラークはニューロンに損傷を与え、信号伝達を損ないます。

これにより、アミロイドプラークを特徴とする脳疾患であるアルツハイマー病のゼブラフィッシュモデル

が確立されます。

テキストプロトコルに概説されているパラメーターを備えたニードルプーラーを使用して、ガラス注入毛細管を準備します。圧力源の圧力設定を 25 PSI に調整します。次に、マイクロインジェクターで、保持圧力を20 PSI、排出圧力を10 PSI、周期値を2.5、ゲーティング値を100ミリ秒に設定します。次に、ガラスキャピラリーに注射液をロードします。

次に、ガラスキャピラリーをマイクロインジェクションホルダーに挿入し、インジェクション角度を45度に調整します。麻酔液で満たされた新しいペトリ皿に1匹の魚を入れます。麻酔がかかったら、鉗子で魚を持ち、注射の向きを向けます。30ゲージの針の先端を使用して、2つの側板が交わる視神経蓋上の頭蓋骨にスリットを生成します。針の先端のみを使用し、頭蓋骨を1ミリメートル以上貫通しないでください。

そして、魚を握り続けながら、切開部位にガラス毛細管の先端を挿入します。ガラス毛細管の先端を終脳に向かって45度の角度で向け、1マイクロリットルの溶液を注入します。魚が回復するまで輸送容器に戻します。そして、定期的に循環する魚の水に容器を接続し、最適な水質を確保します。