ショウジョウバエに閉鎖性外傷性脳損傷を負わせる技術

ネシー下でショウジョウバエの成虫を制御し、テストします。

テストフライをホルダーに入れ、軽くたたいてフライの頭を先端の外側に配置します。ターゲット以外の怪我を避けるために、ハエの口器と体がホルダーの中にとどまるようにしてください。

ハエの頭を下に向けてホルダーを攻撃装置に取り付けます。

この装置は制御されたガス供給に接続されており、怪我を負わせるためのガス推進インパクターが含まれています。

ガスバーストを飛ばしてインパクターを推進し、ハエの頭を攻撃し、外部損傷なしに閉鎖頭外傷性脳損傷を誘発する。

結果として生じる機械的ストレスはニューロンに損傷を与え、その機能を損ないます。

ホルダーを取り外してハエを解放し、バイアルに移して回収します。

コントロールフライはインパクターで叩かずにガスバーストをかける。

フライとテストフライは、損傷の影響を評価する準備ができています。

後2日の成虫の雌のハエを二酸化炭素を使用して麻酔します。

炭酸ガスパッドから細いブラシを使用して、フライをホルダーにそっと移します。

次に、ヘッドが先端からはみ出すまでホルダーを軽くたたきます。

テングが露出している場合は、鈍い1ミリリットルの注射器の針を使用して、口吻を先端の内側にそっと押し込みます。ハエの体、特に口の部分をホルダーの中に入れておくことが重要です。そうしないと、ハエは内臓の損傷や食物を摂取できなくなるために死ぬ可能性があります。

次に、ガス圧を100キロパスカルに設定し、必要に応じて流量を調整します。フライがロードされたら、フライヘッドが下を向くように、コネクタを使用してホルダーをシリンジバレルに締めます。

次に、トグルスイッチを使用して、インパクターを動かしてフライを一度だけ攻撃するガスのバーストを送信します。

次に、フライホルダーを取り外し、フライを二酸化炭素パッドに戻します。

ハエが回復するまで空のバイアルにブラッシングします。

バイアルごとに1羽のフライを保管してください。回復には数分しかかかりません。

このプロセスを繰り返して、実験グループごとに4匹のハエをテストします。テストと偽の2つのグループの処理には、20〜30分しかかかりません。シャムを実験動物と同じように扱いますが、インパクターチューブにエアロゾルバリアを含めないでください。