新生児低酸素性虚血性脳損傷のマウスモデルの確立

麻酔をかけたマウスの子犬を解剖顕微鏡下で腹部を固定します。

首を切開します。

脂肪組織を引っ込めて片側の右頸動脈を露出させます。

動脈を結紮して右脳半球への血流を制限し、虚血状態をシミュレートします。

切開部を閉じ、子犬を低酸素チャンバーに移します。

子犬が意識を取り戻したら、チャンバーを閉じて酸素レベルを下げて低酸素状態を確立します。

脳内の血液供給と酸素レベルの低下により、興奮性神経伝達物質が放出されます。

これらの神経伝達物質は、神経細胞の過興奮性、カルシウム流入、神経細胞膜、細胞タンパク質、DNA へのカルシウム依存性損傷を誘発し、神経細胞死を引き起こします。

それに応じて、ミクログリアが活性化され、炎症誘発性サイトカインが放出され、脳の損傷が悪化します。

子犬が回復して成長するまで一週間待ちます。

子犬に麻酔をかけ、腹部を下にして頭皮を切開します。

半透明の頭蓋骨を通して右半球の脳病変を視覚化し、低酸素性虚血性損傷を検出します。

少なくとも5匹のP7マウスの子犬を麻酔した後、子犬を腹部を上にして解剖顕微鏡の下に置き、首をアルコールで洗浄します。手術を開始するには、はさみを使用して首に0.7ミリメートルの切開を行います。次に、片側の右頸動脈が露出するまで鉗子を使用して脂肪組織を慎重に取り除きます。次に、5-0縫合糸を使用して、片側の右頸動脈を結紮します。

次に、首の切開部を5-0ナイロンで縫合し、切開部を滅菌します。次に、蓋を開けた状態で摂氏37度の低酸素チャンバーで子犬を約1時間回復させます。外科的に操作された別のマウスを低酸素チャンバーに入れて回復します。子犬がすべて完全に目覚めたら、チャンバーの蓋を閉め、ガスレベルを下げて低酸素状態を確立します。

90分間の低酸素状態の後、脳損傷した子犬をケージに戻します。一週間後、怪我の証拠を探すために、以前と同じように子犬を手術の準備をします。頭皮を切開して、右半球の後外側領域の脳病変を特定します。半透明の頭蓋骨を調べて、皮質損傷と海馬損傷の証拠を探し、子犬を負傷した対照または無傷の対照として分類します。確認後、頭皮を縫合糸で閉じ、切開部を滅菌します。