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脳への信号伝達に役割を果たす脊髄を含む中枢神経系の星状細胞のアクアポリン-4タンパク質を認識できるTヘルパー細胞またはTh17細胞を含む注射器から始めます。
これらのTh17細胞を拘束されたマウスの尾静脈に注入します。細胞は血流に入り、体中を循環します。
同時に、百日咳ボルデテラ由来の細菌毒素を腹腔内に投与します。
毒素は血管の内皮バリアを乱し、Th17細胞が脊髄に浸潤することを可能にします。
浸潤したTh17細胞は、アクアポリン-4を発現する星状細胞と相互作用し、活性化されます。
これらの活性化された細胞は炎症誘発性サイトカインを放出し、マクロファージを含む単核免疫細胞の浸潤を引き起こします。
マクロファージは炎症分子を放出し、周囲の神経線維のミエリン鞘に損傷
を与えます。この脱髄は神経信号伝達を妨害し、尾の硬直や後肢の動きの制限につながり、麻痺の発症を示します。
収集から1時間以内に、細胞を1ミリリットルの注射器に移し、尾静脈を介して各レシピエント動物に200マイクロリットルの細胞を静脈内送達します。次に、各マウスに直ちに腹腔内注射し、2日後に200マイクロリットルのPBSで希釈した200ナノグラムの百日咳菌毒素を注射します。