α-シヌクレイン線維の注射によるマウスの神経炎症の誘導

トランスジェニックマウスを背側に配置します。マウスは、凝集しやすいα-シヌクレインタンパク質の変異型を発現します。

誤って折りたたまれたα-シヌクレインタンパク質の凝集体であるα-シヌクレインフィブリルの懸濁液を取ります。

フィ

ブリルを腹腔に注入して、全身分布を可能にします。

血流に入ると、フィブリルは中枢神経系に到達し、血液脳関門の内皮細胞に結合します。

フィブリルは小胞を介して細胞を横切って輸送され、神経組織に入ります。次に、エンドサイトーシスを介してニューロンに侵入し、変異したα-シヌクレインタンパク質の凝集を促進します。

これらの凝集体はエキソサイトーシスによって放出され、隣接するニューロン、ミクログリア、および星状細胞に広がります。

凝集体を認識すると、ミクログリアが活性酸素種を放出し、組織に損傷を与え、サイトカインが放出され、追加の免疫細胞が動員されます。その結果、神経炎症が起こり、神経細胞死に至ります。

マウスを回復させて、α-シヌクレイン媒介性神経炎症を評価します。

腹腔内注射の場合は、イソフルランで麻酔室で動物を短時間麻薬化します。もう一度、動物のつま先をつまんで、適切な麻酔を確保するために後肢を引っ込めないことを確認します。27ゲージの使い捨て皮下注射器に、50マイクロリットルの超音波処理されたα-シヌクレインフィブリルまたはPBSを満たします。

動物を背側の位置に保持し、頭を調査員の反対側に向け、約45度下に向けます。腹壁の後ろにある小腸または盲腸を貫通せずに、マウスの腹膜に直接注射します。動物が麻酔から回復するまで動物を監視します。