実験的自己免疫性神経炎マウスモデルにおける運動機能の評価

マウスをトレッドミルに置いて走行動作を記録し、体の動きを制御する能力を表す運動機能を評価します。

試験後、麻酔をかけたマウスの腹腔に百日咳毒素を注射し、血液神経関門を弱めます。

次に、マウスの肩甲骨の間の毛を取り除き、その領域を消毒し、アジュバントを含むミエリン模倣ペプチドを皮下組織に注射します。

最適な反応を得るために、両方の注入を繰り返します。

ペプチドは抗原提示細胞を刺激し、抗原提示細胞はリンパ節に移動して自己反応性 T 細胞を産生します。

これらの T 細胞は血流に入り、障害のある血液神経関門を通過し、末梢神経を標的にしてサイトカインの放出を引き起こします。

これによりマクロファージと B 細胞が引き寄せられ、ミエリン鞘を分解するエフェクター分子が放出されます。

ミエリンの分解は、神経信号伝達を損ない、実験的自己免疫性神経炎またはEANの発症を損

最後に、トレッドミルテストを繰り返します。マウスは、運動機能障害を示す、走行と手足の動きの調整が困難です。

病気誘発の3日前に、運動機能評価装置の電源を入れ、ライトボタンをオンにします。マウスを手に取り、赤い食用色素の入った容器の上に下ろします。マウスをウォーキングコンパートメントに置き、トレッドミルの速度を毎秒15センチメートルに設定します。トレッドミルの電源を入れ、「記録」をクリックして、歩行機能イメージングシステムを使用して、マウスの走行動作を36秒間キャプチャします。

36秒後、録画とトレッドミルを停止し、練習走の練習走ビデオファイルを指定されたフォルダーに保存します。

最初の予防接種の1日前に、30_1/2ゲージの針を備えた0.5ミリリットルの注射器を使用して、250マイクロリットルのマウス等張PBS IPに1ミリリットルあたり1.6マイクログラムの百日咳毒素を投与し、麻酔をかけた6〜8週間齢の雄C57ブラック6マウスに投与します。

翌日、0.9%生理食塩水と1ミリリットルあたり20ミリグラムの結核菌の同量のペプチド溶液をビーズビーター中の完全なフロイントアジュバントに混ぜ合わせ、室温で最高速度で溶液を1分間

23ゲージの針を備えたシリンジに接種物を装填し、シリンジシャフト内の空気を排出する前に、シリンジを反転させて振ってください。

接種物を送達する前に、肩甲骨の間の正中線のすぐ外側の毛を取り除き、露出した皮膚を70%エタノールで消毒します。

次に、アジソン鉗子を使用して皮膚をつかみ、皮下注射を介して百日咳毒素注射マウスに50マイクロリットルの溶液を送達します。

翌朝、先ほど示したように、250マイクロリットルのPBS IPに1ミリリットルあたり1.2マイクログラムの百日咳毒素を投与し、48時間後にさらに1.2マイクログラムの百日咳毒素IPを注射します。

3日後、3回目の百日咳注射後、以前と同じ注射部位にさらに50マイクロリットルの新たに調製した接種物を投与し、実験終了まで週に2回、動物の臨床スコアと運動機能を監視します。