反応性星膠症を誘発するためのマウスモデルにおける皮質刺し傷の発生

麻酔をかけたマウスを定位固定フレームに固定します。

頭を剃り、その部位を消毒します。角膜の乾燥を防ぐために眼軟膏を塗ります。

蓋骨を露出させる切開を行います。

上にある膜を取り除き、生理食塩水で表面を洗浄します。

皮質をターゲットにした頭蓋骨の領域に印を付けます。

マークされた領域に沿ってドリルします。生理食塩水を塗布して組織の水分補給を維持します。

緩んだ骨片を取り除き、下にある皮質を露出させます。

生理食塩水を浸したジェルフォームを置き、組織の乾燥を防ぎ、血液を吸収します。

プローブホルダーに取り付けられた滅菌ブレードを皮質の上に配置します。次に、ジェルフォームを取り除きます。

ブレードを下げて皮質を貫通し、ストロークを繰り返し水平に動かして機械的損傷を引き起こします。

刃を取り外し、ジェルフォームを使用して血液を吸収します。外科的切開部を縫合します。

損傷部位では、星状細胞は反応性神経膠症を起こし、そこで活性化して増殖し、炎症を軽減し、組織修復をサポートする保護分子を放出します。

このステップでは、完全に鎮静されたマウスを定位固定フレームに入れます。イソフルランに接続されているノーズコーンに鼻を固定します。次に、イヤーバーを締めて、頭が安定していることを確認します。

目の高さから耳の高さまで頭を剃ります。次に、イソプロピルアルコールとベタジンヨウ素溶液を交互に3回スクラブして皮膚を滅菌します。その後、両目が乾燥しないように軟膏を両目に塗ります。

動物のつま先や尻尾をつまんで、動物の麻酔の深さを監視します。マウスは、反応がなく、呼吸が遅く均一であるときに適切な手術面にいます。目のすぐ後ろから耳の間のほぼポイントまで矢状傍皮膚切開を1回しっかりと切り込みます。皮膚を脇に移動し、止血剤で右側をクリップします。

顕微鏡下で、メスの鈍い側と綿の先端のアプリケーターを使用して、頭蓋骨の上にある膜を取り除きます。次に、先端が綿のアプリケーターで0.9%生理食塩水に浸して頭蓋骨をきれいにし、完全に乾かします。小さな定規と油性マーカーを使用して、冠状縫合糸の尾側1ミリメートルで開頭術の前縁に印を付け、次に矢状縫合糸の外側1ミリメートルに開頭術の左端に印を付けます。

次に、矢状縫合糸と冠状縫合糸からそれぞれ4ミリメートルのところに開頭術の右端と尾端の境界をマークします。0.5 ドリルビットを使用して、油性マーカーの輪郭に慎重にドリルで穴を開け、頭蓋骨を完全に突き破らないように注意してください。孤立した頭頂骨を鉗子でそっと押します。薄くなった骨は、周囲が十分に弱くなると、除去する準備ができています。

次に、23ゲージの針を取り付けた10ミリリットルの注射器を使用して、孤立した骨と穴あけされた領域に少量の0.9%生理食塩水を塗布します。マニピュレーターアームを定位固定装置に取り付けます。次に、新しいメスの刃をプローブホルダーに取り付け、鋭い面を吻側に向けてします。

マニピュレーターアームを邪魔にならないようにして、先端を骨の側面に挿入し、1回の動きで引き抜いて、一対の角度の付いた鉗子で骨片を慎重に持ち上げます。次に、浸した吸収性ゲルフォームの小片を覆われていない脳の上に置き、脳が乾燥するのを防ぎ、存在する可能性のある血液を吸収します。ゲルフォームを脳に置いたら、マニピュレーターアームを所定の位置にスイングします。ブレードをジェルフォームの中央に調整します。

次に、ジェルフォームを取り除き、先端が硬膜に穴を開けずに硬膜に触れるまでブレードを下げます。定位固定フレームの垂直アームにあるバーニアスケールを使用して、背腹座標をマークします。次に、マニピュレーターアームを使用して、ブレードを脳の中に正確に3ミリメートルゆっくりと下げます。ブレードを5〜10秒間所定の位置に留めます。

次に、ブレードで定位固定腕を吻側尾方向に3回ゆっくりと動かします。反対側の端に移動する前に、ブレードが開頭術の吻側と尾側の境界に到達するのを待ちます。その後、定位固定腕をゆっくりと上げ、脳から刃を外します。

別のゲルフォームを脳表面に置き、余分な血液や体液を吸収します。その間、定位固定腕を取り外し、メスの刃を廃棄します。出血が止まったら、ジェルフォームを取り除きます。

エチロンやプロレンなどの非吸収性縫合糸で皮膚を縫合して傷を閉じ、手術後9〜10日で縫合糸を除去します。次に、0.5〜1ミリリットルの乳酸リンゲル液を皮下投与して、水分補給を確保します。