0 閲覧数 • 2:18 分 • July 8th, 2025
灌流マウスの脳を緩衝液に取ります。
脳は病原菌であるストレプトマイシン耐性リステリア
菌に感染しています。灌流ステップは脳から血液を除去し、細菌負荷測定が組織内のリステリア菌の負荷を確実に反映するようにします。
次に、滅菌ホモジナイザーを使用して脳を均質化し、組織を分解し、細菌を放出します。
次に、バッファーを使用して脳ホモジネートの連続希釈液を調製します。
これらの希釈液を、抗生物質であるストレプトマイシンを含む脳心臓注入寒天プレートにプレートします。
プレートをインキュベートします。脳心臓注入寒天培地はリステリア菌の増殖に栄養素を提供しますが、ストレプトマイシンは耐性菌を選択し、ストレプトマイシン耐性リステリア菌コロニーのみを形成できるようにします。
プレート上のコロニーの数を数えて、脳内の生存可能な感染性細菌負荷の尺度であるコロニー形成単位を決定します。
鉗子を使用して頭蓋骨を開いて脳を露出させ、脳の下側と頭蓋骨の付け根の間にへらを置き、摂氏 4 度の PBS を 5 ミリリットルの 15 ミリリットルのチューブに脳を慎重に移します。
バイオセーフティキャビネットにチップを挿入し、10ミリリットルのコニカルチューブに5%漂白剤、滅菌水、75%エタノール、および滅菌水溶液を連続して15秒間実行します。先端が完全に滅菌されたら、感染した脳をチューブ内で均質化します。
滅菌PBSで各臓器ホモジネートの10倍の連続希釈液を調製し、その希釈液を脳心臓注入寒天プレートにプレートします。次に、ホモジネート希釈培養物を摂氏37度で一晩インキュベートし、各プレート上のコロニーの数を数えて、臓器または血液ミリリットルあたりの細菌の総数を決定します。
本記事では、灌流後のマウス脳におけるListeria monocytogenesの感染性細菌量の定量プロトコルを実演します。この手法では、感染後の脳組織内の細菌負荷を正確に評価するために、慎重な組織処理、選択培地への塗抹、およびコロニー計数を行います。
灌流したマウス脳組織における細菌定着量を定量化することで、感染動態および組織特異的な病原体負荷を精密に評価することが可能になります。このワークフローは、感染症モデルにおけるメカニズム的なリスク低減をサポートし、宿主・病原体相互作用研究におけるターゲットバリデーションに有用な情報を提供します。正確な細菌負荷の測定は、抗感染症薬の研究開発におけるトランスレーショナルリサーチおよびポートフォリオ決定において極めて重要です。
この手法は、初期の仮説検証から前臨床モデルの妥当性確認、そしてトランスレーショナルリサーチに至るまで、感染症研究の発見プロセスの各段階に統合されます。
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最終更新:22 8月 2026