リステリア菌感染後のマウス脳における細菌コロニー形成の評価

灌流マウスの脳を緩衝液に取ります。

脳は病原菌であるストレプトマイシン耐性リステリア

菌に感染しています。

灌流ステップは脳から血液を除去し、細菌負荷測定が組織内のリステリア菌の負荷を確実に反映するようにします。

次に、滅菌ホモジナイザーを使用して脳を均質化し、組織を分解し、細菌を放出します。

次に、バッファーを使用して脳ホモジネートの連続希釈液を調製します。

これらの希釈液を、抗生物質であるストレプトマイシンを含む脳心臓注入寒天プレートにプレートします。

プレートをインキュベートします。脳心臓注入寒天培地はリステリア菌の増殖に栄養素を提供しますが、ストレプトマイシンは耐性菌を選択し、ストレプトマイシン耐性リステリア菌コロニーのみを形成できるようにします。

プレート上のコロニーの数を数えて、脳内の生存可能な感染性細菌負荷の尺度であるコロニー形成単位を決定します。

鉗子を使用して頭蓋骨を開いて脳を露出させ、脳の下側と頭蓋骨の付け根の間にへらを置き、摂氏 4 度の PBS を 5 ミリリットルの 15 ミリリットルのチューブに脳を慎重に移します。

バイオセーフティキャビネットにチップを挿入し、10ミリリットルのコニカルチューブに5%漂白剤、滅菌水、75%エタノール、および滅菌水溶液を連続して15秒間実行します。先端が完全に滅菌されたら、感染した脳をチューブ内で均質化します。

滅菌PBSで各臓器ホモジネートの10倍の連続希釈液を調製し、その希釈液を脳心臓注入寒天プレートにプレートします。次に、ホモジネート希釈培養物を摂氏37度で一晩インキュベートし、各プレート上のコロニーの数を数えて、臓器または血液ミリリットルあたりの細菌の総数を決定します。