Cre-LoxPを介した脳海綿状奇形のマウスモデルにおける誘導

血管の安定性に不可欠なCCM2遺伝子を保有する遺伝子組み換えマウスの子犬から始めます。

この遺伝子は、2つのloxP部位に隣接しています。子犬の内皮細胞は、エストロゲン受容体または小胞体に融合したCreリコンビナーゼ酵素も発現します。

4-ヒドロキシタモキシフェンまたは4-HTを子犬に胃内注射します。

4-HTは内皮細胞を介して拡散し、Cre-ER融合タンパク質のエストロゲン受容体部分に結合します。

この結合は、内皮細胞の核に入り、loxP部位に結合するCreリコンビナーゼを活性化するコンフォメーション変化を引き起こします。

これにより、loxP部位間の組換えイベントが促進され、ループが形成され、CCM2遺伝子セグメントが切除されます。

CCM2 の喪失は内皮細胞の完全性を破壊し、血管壁の安定性を損

ないます。

これにより、脳海綿状奇形または CCM として知られる腫れた異常な血管構造が発生し、壊れやすく漏れやすい。

まず

、4-HT を 100% エタノールに 10 ミリリットルあたり 10 ミリグラムの濃度に溶解します。30マイクロリットルのアリコートを準備し、摂氏マイナス80度で保管します。使用当日、分注した4-HTをコーン油で0.5ミリグラム/ミリリットルに希釈します。次に、インスリン注射器を使用して、50マイクロリットルの4-HTをP1新生児の子犬に胃内注射し、実験的なCCM病変を誘発します。