皮質オルガノイド切片における神経細胞の老化検出

老化のさまざまな段階にあるグリア細胞とニューロンを含む皮質オルガノイドの薄い部分を含むスライドから始めます。

老化したニューロンは、細胞機能が低下した老化状態にあり、高レベルのベータガラクトシダーゼを含んでいます。

切片は、細胞構造を安定させるための固定剤と、それらの膜を透過化するための透過性剤で前処理されます。

スライドを染色容器に入れ、バッファーで洗浄し、溶液の痕跡を除去します。

ベータガラクトシダーゼ酵素の基質を含む溶液でスライドを染色し、インキュベートします。

基質は細胞に入り、そこでベータガラクトシダーゼが基質を切断し、老化したニューロンにさらに蓄積する青色の生成物を生成します。

セクションを繰り返し洗浄します。

退色防止封入剤を加えて固化させ、染色部分の完全性を確保します。

スライドを顕微鏡で観察します。濃い青色の生成物がある領域は、オルガノイド内の老化したニューロンを示しています。

オルガノイドを凍結切片した後、スライドを蓋付きのスライドスタンディング容器に移して余分な封入液を除去し、切片したオルガノイド組織を室温で10分間PBSで3回洗浄します。次に、スライドを作ったばかりのベータガラクトシダーゼ染色液と一緒に摂氏37度で一晩インキュベートします。染色した組織を室温でPBSでそれぞれ10分間3回洗浄し、ベータガラクトシダーゼ溶液を除去します。

次に、洗浄したティッシュをガラスの退色防止封入剤で接入し、接入液を室温で30分間固化させてから顕微鏡で観察します。