マウス脊髄ニューロンの脱髄と再髄鞘形成

まず、

麻酔をかけたマウスを定位フレーム上に置き、脊髄の領域を露出させる切開をします。

洗

剤であるリゾレシチンを含む注射器を取ります。露出した領域の上に置き、正中線の片側に触れます。

脊髄の白質にリゾレシチンを注射し、有髄軸索を持つニューロンを標的にすると、より速い信号伝達が促進されます。

逆流を防ぐためにシリンジを所定の位置に短時間置いてから取り外します。

切開部を縫合し、消毒剤を塗布して感染を防ぎ、マウスを回復させます。

注射

されたリゾレシチンは、ニューロンの周囲のミエリン鞘を破壊し、軸索信号伝達を損ないます。

このプロセスはまた炎症を引き起こし、免疫細胞を動員してミエリン破片を除去し、神経病理学的状態である軸索の局所的な脱髄を引き起こします。

時間が経つにつれて、オリゴデンドロサイト前駆細胞はこの部位に移動し、オリゴデンドロサイトに分化します。

その後、これらのオリゴデンドロサイトは、脱髄ニューロンの周りのミエリン鞘を再生し、徐々に信号伝達を回復します。

背骨の湾曲を誇張するために、動物を定位フレームに移動し、背側を上にし、折りたたんだペーパータオルで中央部を上げます。次に、頭を歯クランプで固定し、腕と尾をサージカルテープで固定します。イヤーバーを安定させる必要はありません。

次に、メスを使用して、耳のすぐ下から始めて尾側方向に切断し、3センチメートルの正中線切開を行います。次に、2 つの大きな脂肪構造の間の溝を見つけ、両手の細い鉗子を使用してこれらを引き離します。レトラクターを広げて手術野を開きます。

手術用顕微鏡下で、C57ブラック6マウス系統に特徴的なT2椎骨の顕著な骨の成長を見つけます。椎骨を見るには、閉じたバネハサミで重ねられた筋肉組織を鈍く解剖します。次に、T3 と T4 の硬い表面を感じて、適切な解剖学的位置を確認します。

次に、T3とT4の間の結合組織に浅い横方向の切り込みを入れます。切り込みが深すぎるとコードに穴が開いて損傷するので注意してください。出血は一般的であり、スポンジ槍で治すことができます。脊髄は硬膜の厚い層で覆われており、この髄膜層がまだ切断されていない場合は見えます。

硬膜が無傷のままの場合は、32 ゲージの金属針で横方向に優しくこすり、慎重に取り除きます。下にある髄膜はそれほど厚くなく、見えにくい残りの髄膜に穴を開けないでください。くも膜から脳脊髄液が漏れた場合は、スポンジスピアで取り除きます。毛細血管を脊髄上の所定の位置に動かすことから注射を開始します。

顕

著な尾側吻側血管は、正中線のランドマークとして使用しないでください。代わりに、背柱に隣接する灰色の白質境界を使用して正中線を推定します。次に、先端が正中線の両側のすぐ外側の脊髄にかろうじて触れるまで、毛細血管をゆっくりと下げます。この位置でアームを所定の位置にロック