細胞外タンパク質を単離するためのマウス脳からの間質液の微小透析

脳にガイドカニューレを埋め込んだ麻酔をかけたマウスを取ります。

カニューレ内のダミープローブは、組織の破片の侵入を防ぎます。

マウスの首に首輪を付けます。

ダミープローブを、高分子量の分子の流れを可能にする特殊な半透膜を含む微小透析プローブに交換します。

プローブは、生理学的バッファーの流量を調整するために、入口ポートと出口ポートを介してポンプに接続されます。

首輪を使用してマウスをケージ内につなぎ、回復させ、流れを開始します。

緩衝液は入口から脳組織に入り、細胞コミュニケーションに関与するタンパク質を含む細胞外空間の間質液(ISF)と混合します。

成分は膜を横切って拡散し、排出口から細分で収集されます。

細胞外タンパク質を含む収集されたISFは、分析の準備が整います。

麻酔をかけたガイドカニューレを埋め込んだ動物の首に首輪を置き、キャップナットとダミープローブを取り外します。マイクロダイアリシスプローブをガイドカニューレにゆっくりと挿入し、キャップナットを締めます。

次に、マウスを自由に動くシステムに接続されたケージに入れ、マウスを首輪でつなぎます。少なくとも1時間後、ローラーポンプとシリンジポンプを順次停止し、シリンジポンプをローラーポンプよりも20%速く設定してポンプを再起動し、出口チューブの自由端を冷蔵フラクションコレクターに置いて脳ISFを収集します。適切な実験量が得られたら、プローブを取り外し、先ほど示したようにマウスの回復を処理します。