胎児神経幹細胞のジカウイルス感染

病

原性ウイルスであるジカウイルスの懸濁液を取り、所望の感染の多様性、ウイルス粒子と細胞の比率を有する。

ウイルス懸濁液をヒト胎児の脳神経幹細胞と混合します。

混合物をインキュベートすると、ウイルスが細胞上の受容体に結合し、ウイルスのエンドサイトーシスが促進されます。

次に、混合物を遠心分離し、内在化されていないウイルス粒子を含む上清を廃棄します。

ウイルスに感染した細胞を培地に再懸濁し、細胞外マトリックスタンパク質でコーティングされたマルチウェルプレートに播種し、細胞接着を可能にします。

プレートをインキュベートします。

内在化されたジカウイルスは、宿主細胞機構を利用して新しいウイルス粒子を生成します。

ウイルスの複製は細胞の形態を大きく変化させ、細胞損傷を引き起こし、隣接する細胞への感染の広がりを促進します。

ジカウイルスに感染した細胞は、さらなる分析に使用できます。

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レットをZIKVストックに再懸濁し、感染の多重度(MOI)を1〜10で再停留させます。ZIKV 溶液の量は 0.5 ミリリットルを超えてはなりません。サンプルを摂氏37度で1時間インキュベートします。その後、チューブを2〜3回反転させ、混合物を室温で216倍gで5分間遠心分離して細胞ペレットを得る。

吸引によって上清を取り除きます。次に、細胞をDPBSで再懸濁してすすぎます。次に、混合物を216倍gで5分間遠心分離し、吸引によって上清を除去します。細胞を12ミリリットルの適切な培地で再懸濁します。次に、500マイクロリットルの感染細胞を24ウェルプレートにロードします。