放射状運動アッセイを用いたC.エレガンスモデルにおける運動障害の評価

線

虫増殖培地上にワームの餌が均一に分布しているペトリ皿を取ります。

各プレートを裏返し、中心に印を付けます。

顕微鏡を使用して、Caenorhabditis elegansワームを中央のマークされたスポットに導入します。

次に、年齢に合ったワームを残りのプレートに導入します。

これらのワームは、ヒトRNA結合タンパク質の野生型または変異型のいずれかを発現し、ニューロン細胞質に有毒な凝集体を形成し、ニューロン死につながります。

これにより、ワームが筋肉の動きを制御する能力が低下し、運動機能が損なわれます。

ワームが一定時間クロールできるようにします。

顕微鏡を使用して、各ワームの最終的な位置に印を付けます。

ワームが中心点から最終位置まで移動した半径方向の距離を測定します。

対照と比較して、野生型タンパク質のレベルが低いワームは軽度の運動障害を示し、野生型タンパク質のレベルが高いワームは中程度の障害を示し、変異型タンパク質を持つワームは重度の障害を示します。

NGMアッセイプレートを逆さまにし、アッセイするC.エレガンス株の識別子を底面にラベル付けします。逆さまのプレートの中央にマーカーで小さな点を作ります。解剖顕微鏡で作業しながら、ワームをアッセイプレートの中央に移し、タイマーを30分間設定します。蓋を皿に戻し、脇に置きます。すべての株が指定されたアッセイプレート上にあるまで、ワームの移送を続けます。

30分後、蓋を外し、プレートを下向きにして解剖顕微鏡の下に置いて、最初のプレートのスコアリングを開始します。寒天を通してすべてのワームが見えるまで、顕微鏡の焦点を調整します。中心点から異なる色のフェルトペンを使用して、各ワームの位置に小さな点を置きます。

一部のワームがそこに到達する可能性があるため、プレートの端を確認してください。また、中心点から移動しなかったワームの数を数えて記録します。各ワームの中心点から最終位置マーキングまでの距離を測定し、定規を使用して距離を記録します。最初のワームポイントはダッシュでマークされています。プレートを時計回りに回転させることで、各ドットの長さデータを

連続して記録します。