血液脳関門の病原体交差と脳細胞感染を研究するためのin vitroモデル

多

孔質膜で区切られた2つのコンパートメントからなるin vitro血液脳関門(BBB)モデルを取り上げます。

上部または管腔コンパートメントには、微小血管内皮細胞が含まれています。これらの細胞はタイトジャンクションを発現し、細胞や分子の通過を制限する血液脳関門内皮を模倣します。

下部または管腔コンパートメントには、脳実質を表すニューロン、星状細胞、およびミクログリアが含まれています。

神経

向性ウイルスを管腔コンパートメントに導入して、血液由来の感染をシミュレートし、インキュベートします。

ウイルスは内皮細胞によってエンドサイトーシスされ、小胞内で細胞内輸送を受け、管腔側で放出されます。

インキュベーション後、上部チャンバーを取り外します。管腔側から培地をサンプリングしてウイルス量を評価し、内皮層の交差が成功したことを確認します。

新鮮な培地を加え、再度インキュベートします。

ウイルスはエンドサイトーシスを介して神経細胞に入り、複製し、ウイルスの子孫を放出します。

増加した細胞外ウイルス量を定量化して、ウイルスの神経浸潤と複製を確認します。

示されている

ように、BBBミニ脳デバイスをセットアップした後、黄熱病ウイルスのフランス神経向性ウイルス株の3,500プラーク形成ユニットを、50マイクロリットルの2%FBS内皮細胞培地で希釈して、管腔コンパートメントの上に非常に慎重に追加します。対照BBBミニ脳に、ウイルスを含まない50マイクロリットルの2%FBS内皮細胞培地を接種します。次に、ウイルスに曝露されたBBBミニ脳デバイスをインキュベーターに24時間入れます。

翌日、インサートを取り外して、先ほど示したようにコンパニオンウェル内の内皮細胞透過性を測定し、各ウェルから1ミリリットルのサンプルを保存して、管腔コンパートメント内のウイルス力価を測定します。

管腔コンパートメントが管腔コンパートメントに漏れないように、インサートの下にそっと

入れます。