神経筋ブロッカー治療による筋収縮の評価

培養有髄運動ニューロン、筋肉制御神経細胞、および多核筋細胞である筋管を含むプレートから始めます。

運動ニューロンは、信号伝達部位である神経筋接合部またはNMJを介して筋管に接続されています。

塩化カルシウムを井戸に加えます。

倒立顕微鏡で観察してライブイメージングを行い、動画を録画します。

カルシウムイオンは運動ニューロンに入り、興奮性神経伝達物質であるアセチルコリン(ACh)の放出を引き起こします。

これらの神経伝達物質は筋管上のACh受容体に結合し、ナトリウムイオンの侵入を可能にし、筋管の収縮を引き起こします。

動画を録画します。次に、ソフトウェアは筋管収縮の色分けされたタイムモーショングラフィックを生成し、赤色は最速の速度を示し、青色は最も遅い速度を表します。

次に、ACh受容体に結合する神経筋遮断薬を導入します。これにより、ナトリウムの流入が防止され、筋管の収縮が制限されます。

動画を再録画します。赤色の減少は、筋管収縮の減少を示します。

筋管収縮を引き起こすには、分化した神経筋接合部細胞の各ウェルに25ミリモルの塩化カルシウムを追加します。そして、治療後1〜2分以内に、プレートを倒立顕微鏡のステージに置きます。生細胞顕微鏡を使用して、筋管収縮のムービーを20秒間記録します。記録の最後に、1ミリリットルのクラーレ1ミリリットルあたり300ナノグラムを培地に加え、さらに20秒間ムービーを記録してから、分析のために適切なモーションベクトル解析ソフトウェアプログラムでムービーファイルを開きます。