遠心分離支援による神経膠芽腫幹細胞へのミトコンドリア移植

深赤色の蛍光標識ドナーミトコンドリアを含むチューブから始めます。

ミトコンドリアを分散させるために低温増殖培地を追加します。

改変神経膠芽腫幹細胞またはGSCを含むウェルの底近くにミトコンドリア溶液を分注します。

これらの改変された脳がん細胞は青色蛍光色素で標識され、赤色蛍光標識された内因性ミトコンドリアを含んでいます。

懸濁液は井戸の表面全体を覆い、ミトコンドリアを均一に分布させます。

培養プレートを遠心分離して、ミトコンドリアを細胞に近づけて

相互作用させます。

次に、培養プレートをインキュベートします。

細胞膜は、ドナーミトコンドリアを含む細胞外物質を飲み込む大きな小胞を形成します。

次に、細胞はこれらの小胞を内在化し、ドナーのミトコンドリアを細胞質に放出し、GSC の代謝と機能を変化させる可能性があります。

共焦点顕微鏡で細胞を観察します。

画像解析後、緑色のドナーミトコンドリアを含む青色細胞と赤色の内因性ミトコンドリアの存在により、ミトコンドリア移植の成功が確認されます。

単離されたMSCミトコンドリアをGSCに移すには、200マイクロリットルの予冷GSC増殖培地をミトコンドリアペレットに加えます。ミトコンドリア製剤をGSC増殖培地で希釈して、GSCに20マイクロリットルのミトコンドリア懸濁液を一貫して添加できるようにします。

次に、ミトコンドリアを井戸の底の近くにゆっくりと加えます。プレートを摂氏4度で1,500倍Gで15分間遠心分離します。次に、すぐに培養物を摂氏37度に置きます。最後に、テキストプロトコルに従って、ミトコンドリア転移の分析、FACS分析、および共焦点イメージングを実行します。