アルツハイマー病モデリングのためのアミロイドβ放出ポリマーマイクロビーズの作製

生体適合性ポリマーと混合された神経毒性アミロイドベータを分泌する細胞の懸濁液を取ります。

懸濁液付きのシリンジをマイクロビーズ製造装置に取り付け、連続的な液体の流れとして押し込みます。

装置内の振動周波数により、流れが均一なミクロンサイズの液滴に分解されます。

これらの液滴は静電場を通過し、均一な電荷を獲得して互いに反発し、融合を防ぎます。

次に、液滴はカルシウムイオンを含むゲル化浴に落ちます。イオンはポリマーを架橋し、細胞を球状マイクロビーズにカプセル

化します。

ビーズをインキュベートしてゲル化を完了し、フィルターに集めます。

フィルターをチューブの上に反転させ、培地を加えてビーズをチューブに洗浄し、懸濁液を培地を含むフラスコに移します。

ポリマーマトリックスは、アルツハイマー病の脳に見られる慢性的な蓄積を模倣して、アミロイドベータのゆっくりとした放出を可能にすると同時に、細胞増殖をサポートする栄養素のアクセスを可能にします。

マイクロビーズを製造するには、20ミリリットルのシリンジに5ミリリットルの細胞アルギン酸懸濁液をロードし、シリンジをカプセル化器に取り付けます。カプセル化器を起動するには、流れを活性化すると、細胞アルギン酸懸濁液がフィーダーに押し出され、液滴の流れがノズルから押し出されます。最初の不均一な流れを避けるために、最初の1ミリリットルを廃ビーカーに集めます。次に、残りの4ミリリットルを流し続け、液滴を塩化カルシウムゲル化浴に落下させます。

ゲル化浴と接触すると、液滴中のアルギン酸塩はゲル化浴中のカルシウムイオンと即座に架橋し、球状のマイクロビーズを形成します。1分後、ゲル化ビーカーを磁気プラットフォームから取り外し、マイクロビーズを攪拌せずにさらに4分間休ませて、室温でゲル化を完了します。マイクロビーズを取り出すには、まず滅菌ピンセットを使用して、大きなアルギン酸塩の破片やアーティファクトを取り除きます。プラスチックピペットの端を切断した後、それを使用してマイクロビーズをゲル化浴から廃ビーカーの上に保持された74マイクロメートルのメッシュフィルターに移します。

確実に成功するために、マイクロビーズの損傷を避けるために常にプラスチックピペットの端を切断し、カプセル化後にビーズをある容器から別の容器に移すたびにこれを行います。

メッシュフィルターを遠心分離管の上に反転させます。その上に適切な培地をピペットでかけ、ビーズをチューブ内で洗い流し、その培地で5分間平衡化させます。次に、インキュベーションとさらなる実験のために、適切な培地で事前に充填されたフラスコにそれらを移します。