ドーパミンニューロンを標的とするためのマウス脳組織切片の免疫組織化学

ドーパミン合成の重要な酵素であるチロシンヒドロキシラーゼを発現するドーパミンニューロンを含むマウス脳組織切片を含むポリマーコーティングされたスライドを取ります.
均一な染色を確保するために疎水性ペンで切片の輪郭を描きます。
組織の形態を維持するために、組織をアセトン-メタノール溶液に固定します。
細胞膜を透過処理するために、界面活性剤を含む緩衝液ですすいでください.
ドーパミンニューロンのチロシンヒドロキシラーゼを標的とする一次抗体とインキュベートし、洗浄して結合していない抗体を除去します.
蛍光色素タグ付き二次抗体、核色素、RNase阻害剤を加えます.
インキュベーション中、二次抗体は一次抗体に結合し、核色素は核を標識し、RNase阻害剤はRNaseを不活性化します.
バッファーですすいでください。次に、エタノールの濃度を上げて組織切片を脱水します.
キシレンでインキュベートして組織を除去します.
処理された組織切片は、レーザーキャプチャマイクロダイセクションの準備が整い、標的ドーパミンニューロンの正確な視覚化と解剖を可能にします。

免疫組織化学を実行するには、疎水性ペンを使用して組織の輪郭を描き、乾燥させます。次に、1〜1のアセトンメタノール溶液で、組織を摂氏負20度で10分間固定します。冷凍庫から組織を取り出した後、PBS中の100〜200マイクロリットルのチロシンヒドロキシラーゼ抗体と1%トリトンで切片を10分間覆います。

次に、1%トリトンを含むPBSを使用してスライドをすすぎ、Alexa Fluor 488で標識された100〜200マイクロリットルのヤギ抗ウサギIgGでセクションを覆います。5分間インキュベートし、PBSを使用してスライドを2回すすぎます。次に、このビデオで前半に示したように、段階的な一連のRNaseフリーエタノールでサンプルをそれぞれ30秒間脱水します。キシレンで1分間インキュベートし、2回目の洗浄を5分間インキュベートします。LCMに使用する直前にスライドを取り外し、自然乾燥させます。