JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 3:42 分 • April 28th, 2025
総頸動脈またはCCAが露出した麻酔マウスから始めます。
CCAは、顔に血液を供給する外頸動脈(ECA)と、脳に血液を供給する内頸動脈(ICA)に分岐します。
まず、ECAの周りに縫合糸を配置し、締めます。
次に、注射部位の下のCCAにしっかりと縫合して血流を遮断します。
サポートのためにCCAの下に湿らせた紙片を挿入します。
注射部位の上に緩い結び目を置き、がん細胞をCCAに注入します。
縫合されたECAにより、細胞はICAに移動して脳に到達します。
注射後、針を抜き、逆流を防ぐためにCCAの遠位結び目を締めます。
最後に、縫合糸をトリミングし、ストリップを取り外し、生理食塩水ですすぎ、傷を閉じます。
時間が経つにつれて、移動したがん細胞は増殖し、脳内で腫瘍を発症します。
細い鉗子を外頸動脈の下に配置し、動脈の下に5-0のシルク縫合糸を通します。縫合糸を結び、締め、余分な線を切ります。総頸動脈の下に細い鉗子を配置し、動脈の下に5-0の絹縫合糸を通します。
結び目を作り、提案された注射部位の近位位置で縫合糸を締めます。余分な縫合糸を切断し、線の約10ミリメートルを残します。糸くずの少ない使い捨てワイパーのストリップを約10 x 5ミリメートル切って湿らせます。
ストリップを折りたたんで、提案された注射部位の頸動脈の下に置きます。これにより、注射中に血管がサポートされます。提案された注射部位への総頸動脈吻側に、緩い結び目で3番目の結紮を配置します。これは注入後にのみ締め付けられます。
細胞懸濁液を穏やかにかき混ぜ、200マイクロリットルの細胞懸濁液を31ゲージの針でインスリン注射器に引き込みます。作動するフットペダルに接続されたシリンジドライバーにシリンジをロードします。
31ゲージの針が付いた細いカニューレをシリンジに取り付け、ラインをプライミングします。頸動脈が適切な位置にあり、加圧されているかどうかを確認してください。2 つの細かい角度の鉗子を使用して、1 つは最初の結紮糸の端に優しく張力をかけ、もう 1 つは 31 ゲージの針を保持し、針に穴を開けないように注意しながら、ベベルを上にして血管の内腔にゆっくりと挿入します。
以前に調製した100マイクロリットルの細胞懸濁液を毎秒10マイクロリットルで総頸動脈にゆっくりと注入します。これにより、5番目の細胞に10倍の2.5倍が血管に送達されます。注射の成功は、頸動脈血管からの血液の除去によって視覚化できます。
逆流や出血を防ぐために、針を引き抜いた直後に緩んだ結紮糸をそっと持ち上げて締めてください。余分な縫合糸を切り取り、湿らせた糸くずの少ない使い捨てワイパーを取り除きます。
P200ピペットを使用して、150〜200マイクロリットルの滅菌水または生理食塩水で手術腔を2回すすぎます。出血がないか確認した後、頸動脈と気管の上に軟部組織、唾液腺、皮膚を再配置します。縫合針ホルダー、鉗子、および吸収性または非吸収性の 6-0 モノフィラメント縫合糸を使用して、切開部の皮膚層を連続パターンで閉じます。