脳腫瘍細胞浸潤のインピーダンスに基づく測定

上部と下部のチャンバーを含む細胞浸潤および移動プレートを取ります。

上部チャンバーには、底部にインピーダンス測定金微小電極アレイを備えた微多孔質膜が含まれています。膜を細胞外マトリックスまたはECM溶液でコーティングします。

下部チャンバーを高血清培地で満たします。

次に、低血清培地を上部チャンバーに加え、培養条件に順応するためにインキュベートします。

微小電極全体に弱い電位を印加して、ベースラインインピーダンスを測定します。

脳腫瘍細胞を上部チャンバーに播種し、ECMに定着させます。

高血清培地は化学誘引物質として作用し、細胞の動きをそれに向けます。

細胞はECMを分解するプロテアーゼを分泌し、膜孔を通って化学誘引物質に向かって移動できるようにします。

細胞が移動すると、細胞は微小電極に付着し、細胞のインピーダンスが増加します。

時間が経つにつれて、より多くの細胞が微小電極に移動して付着し、細胞のインピーダンスがさらに増加し、これらの細胞の侵襲性の可能性を反映します。

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p style='background-color:#ffffff;line-height:1.38;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;padding:0pt 0pt 12pt;' dir='ltr'>リアルタイム細胞分析の5〜6時間前に、リアルタイム細胞分析システムを細胞培養インキュベーターに入れます。浸潤アッセイを設定するには、リバースピペッティングを使用して、細胞外マトリックスゲル1ミリリットルあたり0.1マイクログラムを添加した50マイクロリットルのDMEMを細胞浸潤プレートの上部チャンバーの各ウェルに入れます。

プレーティング直後に、各ウェルから30マイクロリットルの細胞外マトリックス溶液を取り出し、プレートを細胞培養インキュベーターに入れます4時間。測定の6時間前にインピーダンス測定プログラムを設定するには、すべてのエレクトロポレーション細胞培養の培地を低血清培地に交換します。関連するインピーダンス測定ソフトウェアの[レイアウト]タブで、生物学的条件ごとに4つのウェルを選択します。

[スケジュール]タブで、1分間隔で1回限りのベースライン測定スイープステップを設定し、実際の実験のためにそれぞれの個々のクレードルでセルインピーダンスを測定する2番目のステップを設定します。細胞インピーダンス測定開始の1時間前に、化学誘引物質として10%ウシ胎児血清を添加した160マイクロリットルの培地を、細胞浸潤および遊移プレートの下部チャンバーのウェルに加えます。

上部チャンバーのウェルを50マイクロリットルの低血清培地で満たし、チャンバーをシステムのクレードルに入れます。

ソフトウェアの[メッセージ]タブをクリックして、すべてのウェルがコントロールユニットによって認識されるかどうかを判