慢性てんかん誘発ラットにおける興奮性神経伝達物質レベルの評価

対照ラットと、海馬にガイドカニューレと脳波(EEG)電極を埋め込んだ慢性てんかん誘発ラットを取ります。

てんかんの誘発は興奮性神経伝達物質の放出を増加させ、シナプス後細胞へのイオン流入を引き起こし、継続的な興奮性電位を生成します。これにより、電極を使用して記録される発作と呼ばれる電気的活動の同期バースト

半透膜を備えたマイクロダイアリシスプローブをカニューレに挿入します。

ラットを脳波記録システムのケージに縛り付けます。

プローブ入口を介して脳組織に生理学的バッファーを注入します。

発作がないことを確認し、プローブ出口から細胞外液を収集して神経伝達物質レベルを評価します。

てんかんラットの基礎レベルの上昇は、てんかんを介した増加を示しています。

高カリウムバッファーを注入し、サンプルを回収します。

カリウムの増加はニューロンの興奮性を延長し、継続的な神経伝達物質の放出を引き起こします。

てんかんラットと対照ラットの両方で神経伝達物質レベルの一時的な急上昇は、カリウム誘発性の高い増加を示しています。

まず、メーカーのユーザーガイドに従って、初めて使用するマイクロダイアリシスプローブを準備し、リンゲル液で満たします。次に、長さ 10 センチメートルの FEP チューブを切断し、さまざまな色のチューブ アダプターを使用して、プローブの入口カニューレと出口カニューレに接続します。チューブがアダプターに接触し、すべての接続でデッドスペースがないことを確認してください。

動物の頭をしっかりと持ち、ピンセットを使用してダミーカニューレをガイドから取り外します。マイクロダイアリシスプローブをガイドカニューレに挿入し、モデリングクレイを使用してカニューレをさらに固めます。次に、動物をテザーEEG記録システムに接続します。次に、動物をプレキシガラスのシリンダーに入れ、新しい環境を探索させます。目覚めて自由に動くネズミの動きをたどってください。

次に、チューブアダプターを使用して、リンゲル液が入った鈍い22ゲージ針でプローブの入口を2.5ミリリットルのシリンジに接続します。2.5ミリリットルのシリンジのピストンを連続的に押して、10ミリリットルのリンゲル液をプローブに押し込みます。プローブの準備が整ったことを示すために、出口に液体の滴が現れるかどうかを確認します。最後に、FEPチューブに接続された2.5ミリリットルのシリンジに、チューブアダプターでリンゲル液を充填し、輸液ポンプに取り付けます。ポンプを毎分2マイクロリットルで始動し、一晩稼働させます。

ビデオ脳波記録で、サンプル採取前の 3 時間に発作がないことを確認した後、リンゲル液で満たされた FEP チューブのカニューレ注射器を運ぶポンプを停止します。FEPチューブに接続された2.5ミリリットルのシリンジの別のセットを、100ミリモルのカリウム溶液を含む変性リンゲル溶液で満たされたチューブアダプターで取り付けます。ポンプを毎分2マイクロリットルで始動し、作動させます。システム内に気泡がないことを確認し、チューブがアダプターに接触し、すべての接続にデッドスペースがないことを確認します。

次に、プローブの使用準備が整ったことを示すために、出口に液体の滴が現れるかどうかを確認します。次に、リンゲル液で満たされた注射器のFEPチューブを各動物のプローブの入口カニューレに接続し、出口の先端に液滴が現れるのを待ちます。プローブの出口をFEPチューブに接続すると、試験管に採取されます。

FEPチューブを、穴あきキャップ付きの閉じた0.2ミリリットルの試験管に挿入します。また、チューブをモデリング粘土で固定して、チューブが所定の位置に留まるようにします。平衡化のためにサンプルを収集せずにポンプを毎分 2 マイクロリットルで 60 分間稼働させた後、システムはベースライン条件下で 5 回連続して 30 分間の透析液サンプルを収集します。そして、サンプルを氷の上に保存します。

10分後、100ミリモルのカリウムリンゲル液を含むシリンジから通常のリンゲル液にチューブを切り替え、ポンプを作動させます。5 回目の平衡化後透析液を採取した後、10 分ごとに 20 マイクロリットルの透析液画分を 1 時間収集します。次に、さらに 30 分間の透析液サンプルを 3 つ収集し、ポンプを停止します。最後に、実験後、HPLC分析までサンプルを摂氏マイナス80度で保存します。