酸素-グルコース欠乏と再酸素化が細胞間相互作用に及ぼす影響

ラット脳微小血管内皮細胞(RBMEC)の単層培養を含むチャンバースライドを取ります。

細胞はアクチン細胞骨格に結合されたタイトジャンクションタンパク質によって接続されており、血液脳関門の内皮層を模倣しています。

培地を脱酸素ブドウ糖フリー培地に交換し、スライドを低酸素チャンバーに入れます。

酸素とグルコースが利用できないと、ATP 合成が阻害されます。残りのATPはヌクレオチド誘導体に分解されます。

ATPの枯渇はカルシウムポンプを妨げ、酸化還元酵素を活性化する細胞内カルシウムを上昇させます。

次に、酸素化培地を補充し、スライドを酸素化インキュベーターに入れます。活性化された酸化還元酵素は、再導入された酸素を利用してヌクレオチド誘導体を分解し、活性酸素種またはROSを生成します。

ROSは、タイトジャンクションタンパク質間の相互作用を破壊し、アクチン細胞骨格をストレス線維に改造するシグナル伝達経路を誘導し、細胞間相互作用を弱めます。

細胞間相互作用が中断された単層は、分析の準備が整いました。

準備では、製造元の指示に従って低酸素細胞培養システムをセットアップし、校正します。チャンバー環境は、窒素 95%、二酸化炭素 5%、摂氏 37 度である必要があります。次に、グルコースフリーdmemを低酸素チャンバーに4〜6時間置いて脱酸素化します。その後、培地を脱酸素化グルコースフリーDMEMに置き換えて、細胞にストレスを与え始めます。そして、細胞を低酸素チャンバーに2時間入れます。2時間後、細胞をラット脳内皮細胞完全培地に戻します。次に、細胞を1時間通常の状態に戻して、細胞に再酸素化します。