ラット脳組織試料の疎水性組織透明化法

色素や脂質が存在するために不透明な脳組織サンプルから始めます。これらの成分は、蛍光標識ニューロンに光散乱を引き起こします。

メタノール濃度を上げた溶液で組織を順次インキュベートして、組織から水分を除去し、組織を徐々に脱水します。

次に、この組織を濃縮メタノールで処理して残留水分を除去し、完全に脱水します。

次に、組織をジクロロメタンとメタノールを含む初期透明溶媒に移します。

溶媒が組織の奥深くまで浸透するように、穏やかに振とうしながらインキュベートします。

ジクロロメタンは組織から色素や脂質を除去し、光の散乱を軽減し、透明性を高めます。

最後に、組織を疎水性溶媒であるジベンジルエーテルに移し、振らずにインキュベートします。

溶媒は、組織の透明度をさらに高める最終的な透明剤として機能します。

このプロセスにより光の透過性が向上し、標識されたニューロンとその脳組織内の接続をより明確に視覚化できるようになります見本。

サンプルを室温で20%、40%、60%、80%、および100%メタノールでそれぞれ1時間連続インキュベートします。次に、新鮮な100%メタノールで一晩インキュベートします。翌日、サンプルを調製したばかりの66%DCM中、33%メタノール中で室温で3時間振とうしながらインキュベートします。3時間後、サンプルが透明になるまで振らずにジベンジルエーテル中でインキュベートします。次に、イメージングまでジベンジルエーテルに保管します。