トランスジェニックマウスにおける神経炎症の生物発光イメージング

神経炎症と星状細胞の活性化を引き起こし、ルシフェラーゼ発現の増加につながる病原性タンパク質凝集体を含む麻酔をかけたトランスジェニックマウスから始めます。

イメージング中の光の散乱を防ぐために、頭から毛皮を取り除きます。

非特異的な生物発光をブロックするために、刺激のないマーカーで耳に色を付けます。

マウスの体重に基づいて適切な量のルシフェリンを取り、腹腔内に注射します。

ルシフェリンは血流に入り、脳に到達し、活性化された星状細胞に取り込まれます。

星状細胞内では、ルシフェラーゼはルシフェリンを酸化し、生物発光信号を発します。

イメージングパラメータを設定し、生物発光イメージングチャンバーの加熱プレートにマウスを正確に配置します。

適切な麻酔フローを確保し、必要な時間生物発光シグナルをキャプチャします。

次に、関心領域を選択し、ターゲットの生物発光シグナルを定量化します。

このシグナルの強度はルシフェラーゼ活性に対応し、星状細胞の活性化を反映し、神経炎症の直接的な尺度を提供します。

イメージングの前に、イソフルラン麻酔マウスの頭を剃り、脱毛します。非刺激性マーカーで耳を黒く着色し、非特異的な生物発光をブロックします。注射前に動物の体重を量り、150mg/kg体重で注射用のd-ルシフェリンの正確な体積を計算します。

計算された量のd-ルシフェリンを腹腔内に注射し、各動物を麻酔室に戻します。イメージングソフトウェアを起動します。イメージングシステムが動作温度に達したら、コントロールパネルの初期化ボタンをクリックしてシステムを初期化し、ボタンの発光と写真を選択します。

露光時間を60秒に、ビニングを中程度に、fストップを1に、EMゲインをオフに設定します。ブロックを選択して開き、タブの被験者の高さで、ドロップダウンメニューから1.50を選択します。d-ルシフェリンを注射してから10分後、動物をイメージングチャンバーの加熱プレートに置きます。 そして、筋肉が麻酔出口に正しく配置されていることを確認します。

イソフルランの流れを吸入チャンバーからイメージングチャンバーに切り替え、イメージングチャンバーのドアを適切に閉めます。取得ボタンをクリックして生物発光を測定し、60秒かかります。