Preparation of Viral DNA from Nucleocapsids

Moriah L. Szpara; Yolanda R. Tafuri; L. W. Enquist

doi:10.3791/3151

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Preparation of Viral DNA from Nucleocapsids

ヌクレオカプシドからウイルスDNAの調製

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12:45 min

August 16, 2011

DOI: 10.3791/3151-v

Moriah L. Szpara¹, Yolanda R. Tafuri¹, L. W. Enquist¹

¹Department of Molecular Biology,Princeton University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

我々は、感染細胞から高純度のヘルペスウイルスヌクレオカプシドDNAを単離するプロセスを説明します。ソリューションから取り込んだ最終的なDNAは、それが理想的にハイスループットシーケンシング、高忠実度PCR反応、および新たなウイルスの組換え体を生産するトランスフェクションに最適です、高濃度および純度である。

このビデオでは、感染細胞から高純度のウイルス核カプシド、DNAを単離する手順を示しています。まず、脂質膜は、抽出時にデュアルフリーを使用して変性されます。次に、サンプルを超遠心分離機にかけ、ウイルス核カプシドをペレット化し、軽い細胞およびウイルス成分から分離します。

界面活性剤とプロテイナーゼKを添加して、ペレット化された核カプシドからウイルスDNAを放出します。次に、残りのすべてのタンパク質を除去するために、二重フェニルクロロホルム抽出が行われます。最後に、ウイルスDNAを溶液中に沈殿させます。

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