末梢血由来細胞から分化した神経細胞の免疫蛍光顕微鏡法

神経前駆細胞、星状細胞、ニューロンを含む、固定および透過処理された末梢血由来の神経細胞を含むタンパク質でコーティングされたカバーガラスを備えたマルチチャンバースライドを取ります。

非特異的結合部位をブロックするブロッキングソリューションを追加します。

特定の細胞タンパク質に結合する蛍光色素結合抗体とインキュベートし、神経細胞型の同定を可能にします。

バッファーで洗浄して、結合していない抗体を除去します。

蛍光核色素でインキュベートして核を染色します。

カバーガラスを装着媒体のあるスライドに転写します。次に、準備したスライドを適切なフィルターを備えた蛍光顕微鏡の下に置きます。

特定の波長の光を使用して蛍光色素を励起し、より長い波長の光を放出させます。

放出される蛍光シグナルは標識された細胞タンパク質に対応し、さまざまな神経細胞タイプを明確に強調し、再プログラムされた血球の分化を確認します。

PBSと5%BSAのブロッキング溶液を追加します。ロッカープレート上で室温で細胞を1時間ブロックします。1%BSA PBSで抗体の適切な希釈液を調製し、ロッカープレート上で抗体とともに細胞を室温で1.5時間インキュベートします。細胞をPBSで3回洗浄し、洗浄ごとに5分間洗浄します。細胞をDAPIでインキュベートし、顕微鏡で視覚化するためにカバーガラスを封入剤でマウントします。