EAEマウスモデルにおける生物発光イメージング

実験的自己免疫性脳脊髄炎またはEAEの麻酔マウスから始めます。この状態は、目と脳に炎症を引き起こします。

マウスをイメージング装置に置き、背中上部を中央に合わせます。

この領域からの信号干渉を防ぐために、マウスの下部を黒い布で覆います。

イメージングソフトウェアを使用して、マウスの位置を記録します。

生物発光基質を含む試薬を充填した注射器を取り、マウスに腹腔内に注射

します

。試薬は循環して炎症部位に入り、そこで基質は炎症特異的酵素と相互作用します。

酵素と基質の反応により、生物発光シグナルが生成されます。

この信号を監視するために、一定の時間間隔で画像をキャプチャします。

視神経は表面近くにあり、目の周りの生物発光が目立ちます。対照的に、頭蓋骨が放出された光を吸収するため、脳からの信号は弱くなります。

画像では、青は軽度の炎症、赤は重度の炎症を示します。

in vivoイメージングを実行するには、すべてのイメージング手順中にマウスを2〜2.5%のイソフルラン麻酔下に保ちます。装置内に2匹のマウスを隣り合わせに配置し、マウスの上部の棘を中央に配置します。

次に、予防接種部位を黒い布で保護します。画像キャプチャ用のソフトウェアを開き、カメラを初期化します。次に、ベースライン画像を撮影して、マウスの正しい位置を評価します。

その後

、カメラから6.5センチメートルの距離でBフォーカスを使用して、すべての画像をキャプチャします。その後、すぐに使用できる化学発光試薬を1ミリリットルあたり40ミリグラムで混合してから、シリンジに充填します。次に、100マイクロリットルをマウスに腹腔内に注射し、注射の5、10、および15分後に生物発光画像をキャプチャします。